碧云天研发生产的Faustovirus Capping Enzyme (FCE)，即Faustovirus加帽酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来自Faustovirus S17菌株的单亚基mRNA加帽酶。FCE具有给mRNA添加Cap-0帽结构所需的三种酶活性，即三磷酸酶(Triphosphatase, TPase)、鸟嘌呤转移酶(Guanylyltransferase, GTase)和(鸟嘌呤-N7)-甲基转移酶((Guanine-N7)-Methyltransferase, N7 MTase)的活性，它可在真核生物mRNA的5'末端的三磷酸和二磷酸位置催化加入N7-甲基鸟苷帽结构(m⁷GpppNp)，从而产生带有Cap-0帽结构的mRNA [1]。

与牛痘病毒加帽酶(Vaccinia capping enzyme, VCE)相比，FCE具有更宽的反应温度范围和更高的酶活性，且在37ºC和高至55ºC的温度下都能够具备加帽活性。FCE与mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (R7053)协同作用，可一步添加Cap-1帽结构至mRNA。真核生物mRNA Cap-0和Cap-1帽结构的添加以及poly (A)加尾对于其成熟至关重要，其中Cap-0帽结构可以通过保护mRNA免遭5'→3'核糖核酸外切酶降解以增加mRNA稳定性[2]，还可防止三磷酸化的mRNA激活机体的天然免疫反应[3]。

本产品对mRNA添加Cap-0帽结构的原理请参考图1。

图1. 碧云天Faustovirus Capping Enzyme (R7051)对mRNA添加Cap-0帽结构的原理图。首先，FCE通过其RNA三磷酸酶活性将mRNA 5'-三磷酸(5'pppN−)裂解为二磷酸(5'ppN−)；然后，FCE通过其RNA鸟苷酸转移酶活性将GTP连接到mRNA N1的5'-二磷酸形成未甲基化的G帽结构(5'GpppN−)；最后，FCE通过其鸟嘌呤7-甲基转移酶活性，以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作为甲基供体，催化G帽的N7位置的甲基化，最终产生带有Cap-0帽结构的mRNA。

碧云天Faustovirus Capping Enzyme (R7051)对EGFP mRNA加帽后的细胞转染效果请参考图2。

图2. 碧云天Faustovirus Capping Enzyme (R7051)和N公司的同类产品(Competitor)催化EGFP mRNA的5'末端形成Cap-0帽结构，然后将该mRNA转染293T细胞表达EGFP蛋白的效果图。在25μl反应体系(50mM Tris-HCl (pH8.0 @ 25ºC), 5mM KCl, 1mM MgCl₂, 1mM DTT, 0.02% Poloxamer 188, 5μg EGFP mRNA, 0.8U/μl RNase Inhibitor (R0101/R0102/ R0105/ R0106), 0.5mM GTP (100mM, Nuclease free) (D7380), 0.1mM SAM)中分别加入25U的本产品或N公司(Competitor)的FCE，37ºC孵育60分钟反应生成Cap-0帽结构，70ºC孵育10分钟以终止反应。25万个293T (人胚肾细胞) (C6008)在BeyoGold™ 24孔细胞培养板(FCP243)中培养24小时，每孔使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染500ng未添加或添加Cap-0帽结构的EGFP mRNA，继续培养24小时后使用荧光显微镜进行拍照。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。A和B分别为不加帽EGFP mRNA转染后的明场图片和荧光图片；C和D分别为使用本产品添加Cap-0帽结构的EGFP mRNA转染后的明场图片和荧光图片；E和F分别为使用N公司的Faustovirus Capping Enzyme添加Cap-0帽结构的EGFP mRNA转染后的明场图片和荧光图片。EGFP mRNA的制备方法：首先以带有T7 Promoter的EGFP完整编码序列的线性化质粒DNA为模板，使用T7 RNA Polymerase (D7069/R7012/R7013)和ATP (100mM, Nuclease free) (D7378)、CTP (100mM, Nuclease free) (D7379)、GTP (100mM, Nuclease free) (D7380)以及UTP (100mM, Nuclease free) (D7381)，或T7 High Yield RNA Transcription Kit (R7018)，或T7 Quick High Yield RNA Transcription Kit (R7016)转录获得EGFP mRNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

用途：体内或体外翻译前mRNA的加帽；mRNA的5'末端标记。

来源：由大肠杆菌表达Faustovirus Capping Enzyme基因，经纯化而获得。

活性单位定义：One unit of Faustovirus Capping Enzyme is defined as the amount of enzyme required to convert 75pmol of a 20-mer transcript to Cap-0 RNA in 30 minutes at 37ºC.

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存溶液：40mM Tris-HCl (pH8.0 @ 25ºC), 100mM NaCl, 50mM Arginine, 0.1mM TCEP, 50% Glycerol.

Capping Buffer (10X)：500mM Tris-HCl (pH8.0 @ 25ºC), 50mM KCl, 10mM MgCl₂, 10mM DTT, 0.2% Poloxamer 188.

失活或抑制：70ºC加热10分钟可使Faustovirus Capping Enzyme失活。

-20ºC保存，至少两年有效。

本产品使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

由于涉及RNA操作，须严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染。

实验中用到的吸头、离心管等实验耗材必须为RNase free的或须经DEPC处理，推荐选购碧云天的BeyoGold™系列中无RNase和DNase污染的耗材产品。不含RNase的超纯水推荐使用碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(DNase、RNase free) (R0021/R0022)。

桌面等环境以及仪器设备表面的RNase、DNase、RNA和DNA的去除推荐使用碧云天的RNase, DNase, RNA and DNA Away (R0127)进行快速处理。

可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如RNase Inhibitor、超纯水等。

SAM在pH值为7-8，37ºC条件下不稳定，建议在反应开始前根据实际反应数配制新鲜的工作液并放置于冰上，防止SAM降解。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。