中文 | English
订货电话
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
工作日9:00-17:00
订货邮件
order@beyotime.com
订货QQ
4001683301
微信在线咨询
订单下载
碧云天订单.xls
多肽与蛋白> 蛋白检测> 蛋白电泳
Bis-Tris-PAGE凝胶配制试剂盒
产品编号: P0870S
产品包装:30-50gels
选择包装
价格: ¥ 256.00
产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P0870S Bis-Tris-PAGE凝胶配制试剂盒 30-50gels 256.00元

碧云天生产的Bis-Tris-PAGE凝胶配制试剂盒(Bis-Tris-PAGE Gel Preparation Kit),提供了配制Bis-Tris-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制不同浓度的Bis-Tris-PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。相比于传统的Tris-Glycine体系,Bis-Tris-PAGE凝胶的缓冲液为中性略偏酸,可非常高效地减少蛋白质修饰的干扰,并在电泳过程中保持蛋白质的稳定性,条带更清晰锐利;Bis-Tris-PAGE凝胶配制后不易水解,保存时间比较长;Bis-Tris-PAGE凝胶可使用MOPS或MES的电泳缓冲液,适合不同的蛋白质分离范围;Bis-Tris-PAGE使用LDS上样缓冲液,在样品制备过程中保持碱性pH值,仅需加热至70°C即可使蛋白质完全变性,可有效减少加热至接近100°C时部分Asp-Pro肽键的断裂,以保持蛋白质的完整性。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技术广泛用于蛋白质的分离纯化、检测、鉴定、分子量分析等实验,是生命科学研究中最基本的实验技术之一。常见的Western印迹(Western blot)检测就是基于PAGE的[1]。

本试剂盒提供的Gel Buffer采用近中性pH的Bis-Tris缓冲液,不含SDS,建议用于变性蛋白电泳,不建议用于非变性蛋白电泳。电泳时可使用常用的MOPS/MES缓冲系统的SDS-PAGE电泳液,推荐使用BeyoGel™ MOPS SDS Running Buffer (P0741/P0743)或BeyoGel™ MES SDS Running Buffer (P0745/P0747)。MOPS缓冲系统是大分子量和中等分子量蛋白电泳的理想缓冲液,适用于分子量在14-200kDa范围内的蛋白的电泳;MES缓冲系统是低至中分子量蛋白质电泳的理想缓冲液,适用于分子量在2-200kDa范围内蛋白质的电泳。电泳后可以使用Bis-Tris缓冲系统的转膜液进行转膜,推荐使用BeyoGel™ Transfer Buffer (for Bis-Tris Gels) (P0753/P0755)。

碧云天同时提供BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris) (P0842-P0867)。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的Bis-Tris-PAGE凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0870S-1 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
P0870S-2 Gel Buffer (3.5X) 100ml
P0870S-3 凝胶聚合催化剂 0.5g
P0870S-4 TEMED Substitute 0.5ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,一年有效。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED Substitute须避光保存。Gel Buffer (3.5X)和凝胶聚合催化剂也可以室温保存。凝胶聚合催化剂用蒸馏水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。

注意事项:

凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,应当分装成小管-20ºC保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

TEMED Substitute易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

TEMED Substitute易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

如果需要30% Acr-Bis (29:1) (ST003)可向碧云天单独订购。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.准备倒胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳胶的模具,如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)或其它适当模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具(如0.75mm厚度),以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果,可以选择可灌制较大Bis-Tris-PAGE凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净,需特别注意不能有SDS残留。
2.10%凝胶聚合催化剂的配制:例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用蒸馏水溶解,并定容至1ml,即为10%凝胶聚合催化剂。
3.常用蛋白电泳胶的模具(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算,上层胶按1.5厘米高度计算,均含约0.3ml的冗余量)参见下表。
Gel Thickness Volume of Resolving Gel Volume of Stacking Gel
0.75mm 4.0ml 1.0ml
1.0mm 5.4ml 1.5ml
1.5mm 8.0ml 2.0ml
注:下层胶体积已包含适量冗余,请勿全部用于灌制下层胶,以免灌胶时上层胶高度不够。
4.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,并根据下表配制Bis-Tris分离胶(即下层胶):
不同浓度的Bis-Tris-PAGE分离胶的最佳分离范围:
Bis-Tris-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
8%胶 30-90kD
10%胶 20-80kD
12%胶 12-60kD
15%胶 10-40kD

成分 配制不同体积Bis-Tris-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
8%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 2.19 4.37 8.79 13.22 17.59 21.85
Gel Buffer (3.5X) 1.43 2.86 5.71 8.57 11.43 14.29
30% Acr-Bis (29:1) 1.33 2.67 5.33 8.00 10.67 13.33
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03
成分 配制不同体积Bis-Tris-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 1.85 3.71 7.46 11.22 14.93 18.53
Gel Buffer (3.5X) 1.43 2.86 5.71 8.57 11.43 14.29
30% Acr-Bis (29:1) 1.67 3.33 6.67 10.00 13.33 16.67
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积Bis-Tris-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 1.52 3.04 6.13 9.22 12.26 15.19
Gel Buffer (3.5X) 1.43 2.86 5.71 8.57 11.43 14.29
30% Acr-Bis (29:1) 2.00 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积Bis-Tris-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 1.02 2.04 4.13 6.22 8.26 10.19
Gel Buffer (3.5X) 1.43 2.86 5.71 8.57 11.43 14.29
30% Acr-Bis (29:1) 2.50 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
5.按照如下表格配制Bis-Tris-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶):
成分 配制不同体积Bis-Tris-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
4%胶 2 3 4 6 8 10
Ultrapure water 1.14 1.71 2.28 3.42 4.56 5.70
Gel Buffer (3.5X) 0.57 0.86 1.14 1.71 2.29 2.86
30% Acr-Bis (29:1) 0.27 0.40 0.53 0.80 1.07 1.33
10%凝胶聚合催化剂 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.10
TEMED Substitute 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01
注1:按照上述顺序依次加入各种试剂,加入TEMED Substitute前先混匀,加入TEMED Substitute后立即混匀,并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡,并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡,可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
注2:通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关,上表中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。
注3:浓缩胶中可加入适量蓝色、红色或黄色PAGE上层胶染料(500X, 无迁移) (P0710/P0712/P0715)便于上样。
6.推荐使用BeyoGel™ LDS Sample Buffer (4X) (P0731)、BeyoGel™ Sample Reducing Agent (10X) (P0733)进行样品的制备和上样,并在电泳缓冲液中添加适量BeyoGel™ Antioxidant (400X) (P0737),可在电泳过程中最大程度地减少蛋白质氧化,并保持还原型蛋白条带清晰锐利。
7.具体的电泳步骤如下。
a.取出使用本试剂盒配制好的Bis-Tris-PAGE凝胶。
b.将凝胶固定在电泳槽中,平稳、缓慢地拔出梳子。
c.配制电泳液缓冲液。推荐使用BeyoGel™ MOPS SDS Running Buffer (P0741/P0743)或BeyoGel™ MES SDS Running Buffer (P0745/P0747)。
注:建议在电泳缓冲液中添加适量BeyoGel™ Antioxidant (400X) (P0737),本抗氧化剂可在电泳过程中最大程度地减少蛋白质氧化,并保持还原型蛋白条带清晰锐利。
d.内槽加满电泳液,外槽加入电泳液最低至1/3液面处,最高不可漫过胶板。电泳槽推荐使用碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)。
e.上样:将10微升枪头或BeyoGold™凝胶电泳上样吸头(1-200μl) (FTIP205/FTIP206/FTIP208/FTIP209)的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样,枪头避免戳破凝胶,更不能使胶板变形导致样品泄漏。
注:最佳上样量须通过实验来确定,样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。
f.将电泳槽盖子盖好,并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红,黑对黑)。一般在150V电压,电泳40-60分钟左右即可,或溴酚蓝条带电泳至凝胶近底部或实验预定的位置。如果需获得更加平整和锐利的条带,可以把电压调整为100-120V,此时电泳时间需要适当延长。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶数量等因素有关系,需自行适当调整。电泳电源推荐使用碧云天的BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)或BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。注:对于非变性电泳,酸性蛋白(等电点pI<7)正常上样电泳即可;碱性蛋白(等电点pI>7)带正电荷,需将电极反接(即红对黑,黑对红),此时上样孔为正极,样品向下电泳。
g.如果用于Western,按照常规条件进行转膜即可。通常湿转时的电流为300-400mA,转膜60-90分钟。转膜电源推荐使用碧云天的BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085),转膜推荐使用碧云天的MiniBlot™蛋白转膜系统(E6050)或MiniBlot™蛋白转膜转移芯(E6053)。详细的Western操作可以参考碧云天的相关网页: http://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Hachmann JP, Amshey JW. Anal Biochem. 2005. 342(2):237-45.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
P0731 BeyoGel™ LDS Sample Buffer (4X) 2ml/10ml
P0733 BeyoGel™ Sample Reducing Agent (10X) 2ml/10ml
P0737-10ml BeyoGel™ Antioxidant (400X) 10ml
P0741 BeyoGel™ MOPS SDS Running Buffer (20X) 100ml/500ml
P0743 BeyoGel™ MOPS SDS Running Buffer (Powder) 1L/10L
P0745 BeyoGel™ MES SDS Running Buffer (20X) 100ml/500ml
P0747 BeyoGel™ MES SDS Running Buffer (Powder) 1L/10L
P0753 BeyoGel™ Transfer Buffer (20X, for Bis-Tris Gels) 100ml/500ml
P0755 BeyoGel™ Transfer Buffer (Powder, for Bis-Tris Gels) 1L/10L
P0846 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 10%, 10孔) 10块/50块
P0847 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 10%, 15孔) 10块/50块
P0849 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 12%, 10孔) 10块/50块
P0850 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 12%, 15孔) 10块/50块
P0852 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 15%, 10孔) 10块/50块
P0853 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 15%, 15孔) 10块/50块
P0856 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-15%, 10孔) 10块/50块
P0857 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-15%, 15孔) 10块/50块
P0859 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-20%, 10孔) 10块/50块
P0860 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-20%, 15孔) 10块/50块
P0863 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 8-16%, 10孔) 10块/50块
P0864 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 8-16%, 15孔) 10块/50块
P0866 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 8-20%, 10孔) 10块/50块
P0867 BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 8-20%, 15孔) 10块/50块
P0870S Bis-Tris-PAGE凝胶配制试剂盒 30-50gels
物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:
更换校验码
质检证书
输入批号搜寻COA
搜索
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献:
购物车
会员
顶部