碧云天生产的大鼠外周血淋巴细胞分离试剂盒(Rat Peripheral Blood Lymphocyte Separation Kit)是一种基于密度梯度离心原理，简单、快速、高效地从大鼠外周血、脐带血或骨髓细胞中分离出淋巴细胞和单核细胞等细胞的分离试剂盒。本试剂盒主要组分为外周血淋巴细胞分离液，也称为淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium, LSM)、淋巴细胞梯度分离液、Density gradient medium、PBMC分离液、PBMC样本密度分离液或PBMC细胞分离液。本试剂盒中大鼠外周血淋巴细胞分离液与大鼠外周全血近于等渗。本试剂盒中的分离液，和Ficoll-Paque、Ficoll-Hypaque、Histopaque等在使用方法上几乎完全一致。

外周血细胞包括红细胞(Red blood cell, RBC, 即Erythrocyte)、白细胞(White blood cell, WBC, 即Leukocyte)和血小板(Platelet)。红细胞是血液中数量最多的一类血细胞，是血液运送氧气最主要的媒介，哺乳动物成熟的红细胞是无核的；白细胞是一种不均一的细胞群，生理学上根据其形态、功能和来源分为多核的粒细胞(Granulocyte，包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)及单核的细胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC，包括淋巴细胞(Lymphocyte)和单核细胞(Monocyte))；血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆裂解脱落下来的小块胞质，体积很小，具有凝血、止血功能[1]。

淋巴细胞是体积最小的白细胞，约占白细胞的20-40% [2]。淋巴细胞由淋巴器官产生，主要存在于淋巴管中循环的淋巴液里，是具有特异免疫识别功能的细胞系，在机体抗炎症、抗感染及抗肿瘤等免疫过程中发挥着重要作用[3,4]。根据发生迁移、表面分子和功能的不同，淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞三大类。其中T淋巴细胞和B淋巴细胞均来自造血组织。T淋巴细胞参与细胞免疫(Cell-mediated immunity)，主要免疫功能包括抗胞内感染、抗瘤细胞和异体细胞等。目前有重要临床应用的CAR-T (Chimeric antigen receptor T cell，嵌合抗原受体T细胞)就是一种基于T淋巴细胞的细胞免疫疗法。B淋巴细胞参与体液免疫(Humoral immunity)，其主要功能是产生抗体，提呈抗原及分泌细胞因子参与免疫调节；NK细胞由骨髓中的淋巴干细胞分化而来，可直接发挥细胞毒性效应，杀伤病毒感染细胞、肿瘤细胞和异体细胞。淋巴细胞检测是临床血常规项目之一，淋巴细胞异常提示细菌感染、病毒感染、淋巴细胞系统增殖性疾病、再生贫血障碍等。因此，分离和检测淋巴细胞具有重要临床意义。

人外周血中不同血细胞的体积、形态和比重(密度)有所差异：红细胞和粒细胞的比重较大，约1.092；单核的细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重约为1.075，血小板约为1.030 [5]。因此利用一种分离液，其比重在1.075-1.090之间，淋巴细胞和单核细胞由于比重较小在这种分离液中浮起，而红细胞和粒细胞的比重较大，在该分离液中将下沉，从而将单核的细胞从外周血细胞中分离出来。最常用的分离液是采用聚蔗糖(Polysucrose 400/Ficoll 400)和泛影酸钠(Sodium diatrizoate)配制的混合比重约1.070的溶液[6]。

啮齿类动物的淋巴细胞比重稍高于人淋巴细胞[7-8]，本试剂盒提供的大鼠外周血淋巴细胞分离液经过一定的配方优化和改良，和大鼠外周血近于等渗。通过本试剂盒中分离液进行密度梯度离心，离心管中的细胞或液体由上至下分四层：血浆和血小板密度较低，悬浮于分离液的上部，为第一层；单核的细胞(PBMC，包含淋巴细胞和单核细胞)的密度稍低于分离液，位于分离液界面之上，一般为环状乳白色，为第二层，所以移去第一层就可获得PBMC；第三层为透明分离液层；红细胞与粒细胞密度较大，沉于底部，为第四层。

图1. 大鼠外周血淋巴细胞分离液(C0027)分离大鼠外周血效果示意图。

本试剂盒操作简单，操作时间短，分离率高。整个实验只需要简单的移液、离心操作，即可在约1个小时内完成样品淋巴细胞的分离。本试剂盒对于淋巴细胞分离的提取率大于80%。如需获得高纯度目的细胞，可配合使用免疫磁珠进行分选。使用本试剂盒预分离，可减少磁珠的使用量，降低成本。本试剂盒同时提供无菌硅化离心管(10ml)、样品稀释液和清洗液，使用更方便。

本试剂盒品质高，质量控制严格。本试剂盒中分离液使用药用级原料，配方经过优化处理，无菌，内毒素小于0.5EU/ml。

本试剂盒应用范围广。本试剂盒不仅适用于稀释后的抗凝血液样品，也可用于未经稀释的抗凝血液样品；可分离淋巴细胞，还可分离一定纯度的血浆；分离得到的淋巴细胞可直接检测，也可进行细胞培养。

按使用说明操作，样品体积为2ml时，200ml本试剂盒可进行约100次淋巴细胞分离。

室温避光保存，两年有效。本试剂盒严禁冷藏或冷冻保存。

大鼠外周血淋巴细胞分离液使用本前须颠倒混匀，并在无菌条件下吸取，避免微生物污染。

如果要对分离的淋巴细胞进一步培养，须在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。

本试剂盒宜室温保存，严禁冷藏冷冻保存。低温条件下，大鼠外周血淋巴细胞分离液会出现白色结晶，影响分离效果。

由于大鼠外周血淋巴细胞分离液在低温时密度升高，而在高温的时候密度会降低，因此使用本试剂盒的温度要求是18-22ºC，最佳分离温度是20ºC。不同血液样品，分离效果不同。离体时间较长、运输等因素可能导致其分离效果不佳。血液样品宿主的身体状况、使用药物情况、患病情况及性别等因素均可能影响分离效果。

部分塑料的离心管(如聚苯乙烯, PS)带有静电，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。推荐使用无菌硅化离心管或碧云天聚丙烯材质的离心管(FTUB515/FTUB550)。

为避免细胞活性降低和提高淋巴细胞分离效果，请选用样品稀释液或不含有钙镁离子的缓冲液或生理盐水对血液样品进行稀释。

由于不同种属动物免疫细胞密度的差异，本产品仅适用于大鼠外周血淋巴细胞分离，不适用于其它动物。不同动物血液须选用特定的分离液。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。