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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
Endonuclease IV
产品编号: D6783S
产品包装:500U
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价格: ¥ 256.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6783S Endonuclease IV 500U 256.00元
D6783M Endonuclease IV 2KU 798.00元
D6783L Endonuclease IV 10KU 3198.00元

碧云天生产的Endonuclease IV,即核酸内切酶IV,来自大肠杆菌,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组内切酶。Endonuclease IV是一种DNA损伤修复酶,并在多种DNA氧化性损伤(Oxidative damage)修复中发挥作用。该酶可识别双链DNA分子上的脱嘌呤/脱嘧啶(Apurinic/Apyrimidinic, AP)位点,并切割AP位点5'端的第一个磷酸二酯键,产生3'羟基和5'脱氧核糖磷酸 (5'-deoxyribose phosphate,dRP)末端;Endonuclease IV酶具有3'二酯酶(3'-diesterase)活性,可以从受损双链DNA的3'末端释放磷酸乙醇酸(3'-phosphoglycolate)、3'-α,β-不饱和醛(unsaturated aldehyde)、磷酸乙醇醛(phosphoglycoaldehyde)或3'-磷酸等;Endonuclease IV酶还具有3'-5'外切酶活性,其首选底物是具有3'-凹陷末端的双链DNA,该活性对缓冲液离子强度、金属离子、EDTA和还原试剂非常敏感;这个酶的活性不需要Mg2+, 但Mg2+的加入可以提高酶活性;体内Endonuclease IV酶可用于修复自由基对DNA链所造成的损伤 [1,2]。

本产品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。

图1. 碧云天Endonuclease IV (D6783)识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。Endonuclease IV识别双链DNA分子上的AP位点,并切割AP位点5'端的第一个磷酸二酯键,产生3'羟基和5'脱氧核糖磷酸末端;还具有3'二酯酶活性,可以释放DNA的3'磷酸、3'-α,β-不饱和醛、磷酸甘油醛和其他3'封闭基团。

碧云天生产的Endonuclease IV (D6783)催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。

图2. 碧云天Endonuclease IV (D6783)和国外N公司的同类产品(Competitor)催化酶切含AP位点双链DNA的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Endonuclease IV,37ºC孵育30分钟进行损伤位点切除反应,反应完毕后立即放至冰上,并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212),随后用BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%) (R0243/R0244)进行电泳分析,最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):50mM Tris-HCl,100mM NaCl,10mM MgCl2,1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC),20pmol含AP位点的双链DNA以及不同浓度的Endonuclease IV。含AP位点的双链DNA的制备方法:将含dU碱基的31nt单链DNA和正常的与其互补的27nt单链DNA按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA;随后使用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)、Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)或Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解,从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA,最终可以被Endonuclease IV所识别和酶切。实验检测表明:碧云天Endonuclease IV (D6783)和国外N公司的同产品具有类似催化酶切含AP位点双链DNA的效果。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

用途:可用于DNA损伤、修复和DNA结构研究;碱性洗脱(Alkaline elution);碱性解旋(Alkaline unwinding);单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis);单核苷酸多态性分析(Single nucleotide polymorphisms, SNP)。

来源:由大肠杆菌表达纯化而获得。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave 1pmol of a 34-mer oligonucleotide duplex containing a single AP site in a total reaction volume of 10μl in 1 hour at 37ºC.

纯度:大于95%,无除其本身以外的DNA内切酶活性和外切酶活性,无RNA酶活性。

酶储存溶液:10mM Tris-HCl (pH7.4 @ 25ºC), 250mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 200μg/μl BSA, 50% (v/v) Glycerol, 0.15% Triton X-100.

失活或抑制:85ºC加热20分钟可使Endonuclease IV失活。

10X Endonuclease IV Buffer: 500mM Tris-HCl (pH7.9 @ 25ºC), 1M NaCl, 10mM DTT, 100mM MgCl2.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6783S-1 Endonuclease IV (10U/µl) 50μl
D6783S-2 10X Endonuclease IV Buffer 0.2ml
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6783M-1 Endonuclease IV (10U/µl) 200μl
D6783M-2 10X Endonuclease IV Buffer 0.8ml
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6783L-1 Endonuclease IV (10U/µl) 1ml
D6783L-2 10X Endonuclease IV Buffer 2.0ml×2
- 说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 使用Endonuclease IV切除双链DNA中的AP位点。
a. 双链DNA的制备:使用碧云天Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)使单链DNA (中间含有一个或多个脱氧尿嘧啶碱基dU)和其互补的单链DNA (中间不含有脱氧尿嘧啶碱基)退火形成双链DNA。
b. 含AP位点双链DNA的制备:使用碧云天Uracil-DNA Glycosylase (E.coli) (D7360)、Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)或Uracil DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)处理上一步骤中退火的双链DNA,生成含有AP位点的双链DNA。
c. 酶切双链DNA中的AP位点:
(a) 参考下表在冰浴中配制反应体系。
Component Volume
Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 15µl
10X Endonuclease IV Buffer 2µl
dsDNA with AP site (10µM/µl) 2µl
Endonuclease IV (10U/µl) 1µl
注:请把除Endonuclease IV以外的组分充分混匀后再加入Endonuclease IV,加入Endonuclease IV后可以用移液器吹打混匀。如果待酶切DNA量较大,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
(b) 反应条件:37ºC,30分钟。
(c) 终止反应:85ºC加热20分钟,或者冰浴中孵育1-2分钟并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)。
2. 其他应用请参考相关文献进行。
参考文献:
1. Kerins SM, Collins R, McCarthy TV. J Biol Chem. 2003. 278(5):3048-54.
2. Kong XJ, Wu S, Cen Y, Chen TT, Yu RQ, et al. Analyst. 2016. 141(14):4373-80.
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D7362S Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) 100U
D7362M Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) 500U
D7364S Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) 200U
D7364M Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) 1000U
D7364L Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) 5000U
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