碧云天生产的Endonuclease IV，即核酸内切酶IV，来自大肠杆菌，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组内切酶。Endonuclease IV是一种DNA损伤修复酶，并在多种DNA氧化性损伤(Oxidative damage)修复中发挥作用。该酶可识别双链DNA分子上的脱嘌呤/脱嘧啶(Apurinic/Apyrimidinic, AP)位点，并切割AP位点5'端的第一个磷酸二酯键，产生3'羟基和5'脱氧核糖磷酸 (5'-deoxyribose phosphate，dRP)末端；Endonuclease IV酶具有3'二酯酶(3'-diesterase)活性，可以从受损双链DNA的3'末端释放磷酸乙醇酸(3'-phosphoglycolate)、3'-α,β-不饱和醛(unsaturated aldehyde)、磷酸乙醇醛(phosphoglycoaldehyde)或3'-磷酸等；Endonuclease IV酶还具有3'-5'外切酶活性，其首选底物是具有3'-凹陷末端的双链DNA,该活性对缓冲液离子强度、金属离子、EDTA和还原试剂非常敏感；这个酶的活性不需要Mg²⁺, 但Mg²⁺的加入可以提高酶活性；体内Endonuclease IV酶可用于修复自由基对DNA链所造成的损伤 [1,2]。

本产品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。

图1. 碧云天Endonuclease IV (D6783)识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。Endonuclease IV识别双链DNA分子上的AP位点，并切割AP位点5'端的第一个磷酸二酯键，产生3'羟基和5'脱氧核糖磷酸末端；还具有3'二酯酶活性，可以释放DNA的3'磷酸、3'-α,β-不饱和醛、磷酸甘油醛和其他3'封闭基团。

碧云天生产的Endonuclease IV (D6783)催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。

图2. 碧云天Endonuclease IV (D6783)和国外N公司的同类产品(Competitor)催化酶切含AP位点双链DNA的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Endonuclease IV，37ºC孵育30分钟进行损伤位点切除反应，反应完毕后立即放至冰上，并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)，随后用BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%) (R0243/R0244)进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl₂，1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC)，20pmol含AP位点的双链DNA以及不同浓度的Endonuclease IV。含AP位点的双链DNA的制备方法：将含dU碱基的31nt单链DNA和正常的与其互补的27nt单链DNA按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA；随后使用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)、Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)或Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA，最终可以被Endonuclease IV所识别和酶切。实验检测表明：碧云天Endonuclease IV (D6783)和国外N公司的同产品具有类似催化酶切含AP位点双链DNA的效果。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

用途：可用于DNA损伤、修复和DNA结构研究；碱性洗脱(Alkaline elution)；碱性解旋(Alkaline unwinding)；单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis)；单核苷酸多态性分析(Single nucleotide polymorphisms, SNP)。

来源：由大肠杆菌表达纯化而获得。

活性单位定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave 1pmol of a 34-mer oligonucleotide duplex containing a single AP site in a total reaction volume of 10μl in 1 hour at 37ºC.

纯度：大于95%，无除其本身以外的DNA内切酶活性和外切酶活性，无RNA酶活性。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH7.4 @ 25ºC), 250mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 200μg/μl BSA, 50% (v/v) Glycerol, 0.15% Triton X-100.

失活或抑制：85ºC加热20分钟可使Endonuclease IV失活。

10X Endonuclease IV Buffer: 500mM Tris-HCl (pH7.9 @ 25ºC), 1M NaCl, 10mM DTT, 100mM MgCl₂.

-20ºC保存，至少两年有效。

本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。