碧云天研发生产的Exonuclease III，即核酸外切酶III，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种能够特异催化缺刻或线性双链DNA从3'到5'方向降解的核酸外切酶[1]。本产品可以用于定点突变、探针制备、形成巢式缺失，也可用于在双脱氧测序反应中产生单链线性DNA[1, 2]。

Exonuclease III对平末端或5'突出末端的双链DNA具有催化偏好性，对3'突出末端双链DNA的催化效率受粘性末端长度的影响，超过4个碱基的3'突出末端会抑制Exonuclease III的酶切活性；不能水解单链DNA及RNA[3]。同时，Exonuclease III还具有RNase H、3'-phosphatase和AP-endonuclease活性[4]。

Exonuclease III与Exonuclease I (D6000)不同的是，对单链DNA无催化降解活性，只能特异性催化具有5'/3'突出末端、平末端或缺刻的双链线性DNA沿3'到5'方向的降解，逐步去除单个dNMP；对于单链DNA从3'到5'方向的降解，推荐使用碧云天Exonuclease I (D6000)；对于单链DNA/RNA从3'到5'方向降解或将带有3'突出末端的双链DNA或双链RNA生成平末端，推荐使用碧云天Exonuclease T (D6003)；对于单链DNA从5'到3'方向的降解或部分消除双链DNA的5'单链突出末端，推荐使用碧云天RecJf Exonuclease (D6006)；对于双链或单链DNA从5'到3'方向的降解，推荐使用碧云天T5 Exonuclease (D7082)；对于带有5'磷酸化修饰的双链或单链线性DNA的降解，推荐使用碧云天Lambda Exonuclease (D7084)；对于双链DNA从5'到3'方向的消化，推荐使用碧云天Exonuclease VIII, truncated (D7088)。

碧云天Exonuclease III (D6002)识别并酶切双链DNA的原理请参考图1。

图1.碧云天Exonuclease III (D6002)识别并酶切双链DNA的原理图。

碧云天Exonuclease III (D6002)催化降解不同类型双链DNA的效果请参考图2。

图2.碧云天Exonuclease III (D6002)和N公司的同类产品(Competitor)催化降解不同类型双链DNA的效果图。在50µl反应体系(10mM Bis-Tris-Propane-HCl (pH 7.0 @ 25ºC), 10mM MgCl2, 1mM DTT)中加入10pmol不同类型的双链DNA (图A：带有3'粘性末端的双链DNA；图B：带有5'粘性末端的双链DNA；图C：带有平末端的双链DNA；图D：带有缺刻的双链DNA)以及图中指定量的本产品或N公司的Exonuclease III，适量BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)，37ºC孵育30分钟进行反应，反应结束后加入终浓度为11mM的EDTA，再70ºC加热30分钟进行失活，随后立即放至冰上，并加入DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，随后用3.5%琼脂糖凝胶电泳(170V电泳30分钟)进行电泳分析，并使用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)室温染色5分钟，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的消化降解各类型双链DNA的效果。各类型双链DNA的制备方法：将不同长度的互补DNA单链按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成不同类型的双链DNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

用途：定点突变；特异性探针的制备；形成巢式缺失；PCR产物的克隆；在双脱氧测序反应中产生单链线性DNA；与S1 Nuclease配合使用，在DNA中形成单向缺失。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白，表达基因为大肠杆菌Exonuclease III。

活性单位定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of acid-soluble total nucleotide in a total reaction volume of 50μl in 30 minutes at 37°C in 1X Reaction Buffer with 0.15mM sonicated duplex [3H]-DNA.

纯度：不含除Exonuclease III以外的其它种类DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：5mM K3PO4 (pH6.5 @ 25ºC), 200mM KCl, 200µg/ml BSA, 0.05mM EDTA, 5mM DTT, 50% (v/v) Glycerol.

Reaction Buffer (10X)：100mM Bis-Tris-Propane-HCl (pH 7.0 @ 25ºC), 100mM MgCl2, 10mM DTT.

失活或抑制：反应结束后先加入终浓度为11mM的EDTA终止反应，再进行70ºC加热30分钟，使Exonuclease III充分失活。

-20ºC保存，两年有效。

Exonuclease III使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

Exonuclease III对作用底物具有高度选择性，仅特异性催化双链DNA从3'到5'方向的降解，不能催化单链DNA和RNA的消化。请务必选择特定类型的底物，使用Exonuclease III进行酶切反应。

当单链DNA的5'端和3'端能相互配对形成双链时，双链部分也可以被Exonuclease III所酶切消化的。因此需要通过二级结构的预测和分析来确定单链DNA是否也可能被Exonuclease III所部分酶切消化。

3'突出末端超过4个碱基的双链DNA会抑制Exonuclease III的催化活性，不能被Exonuclease III有效水解。

Exonuclease III的最佳反应温度是37ºC，反应结束后先加入终浓度为11mM的EDTA终止反应，再进行70ºC孵育30分钟，可以使其完全失活。

碧云天同时在售多种类型核酸外切酶，请根据底物类型及实验需求，自主选择合适的核酸外切酶产品进行酶切反应。

Exonuclease III不能催化硫代磷酸链的水解，因此可通过加入含α-硫代磷酸的核苷酸来保护一个末端不被酶切，对DNA形成单向缺失。

桌面以及仪器设备表面等环境中的RNase、DNase、RNA和DNA的去除推荐使用碧云天RNase, DNase, RNA and DNA Away (R0127)进行快速处理。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。