碧云天研发生产的Recombinant APOBEC3A (A3A)，即载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A (Apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3A, or Apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like 3A)，也称为APOBEC3A、A3A、ARP3、PHRBN、DNA dC->dU-editing enzyme APOBEC-3A或DNA dC->dU-editing enzyme APOBEC3A，是碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种DNA胞嘧啶脱氨酶。

APOBEC3A属于APOBEC3基因家族，在机体抗病毒过程中有重要作用，其中的作用机制之一是可以把外源的病毒的单链DNA中的胞嘧啶脱氨基变成尿嘧啶，从而导致DNA的降解[1]。APOBEC3A可将单链DNA中的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，后续PCR扩增时就会相当于产生了C变成T的突变，从而可以用于特异性检测DNA甲基化水平。APOBEC3A可以用于基因组DNA的甲基化测序，如酶法甲基化测序(Enzymatic methyl sequencing, EM-seq)和APOBEC偶联甲基化测序(APOBEC-coupled epigenetic sequencing, ACE-seq)等[2]。

亚硫氢酸盐全基因组测序(Whole genome bisulfite sequencing, WGBS)一直是研究DNA甲基化图谱的金标准，但亚硫氢酸盐的化学反应会对DNA造成损伤，导致DNA断裂和丢失以及在甲基化区域表现出明显的GC偏好性，而基于酶法的基因组DNA甲基化测序可以克服这些缺点。EM-seq通过酶法完成全基因组DNA甲基化测序建库包括两个步骤：第一步使用TET2 (Tet methylcytosine dioxygenase 2)和T4-BGT (T4-phage beta-glucosyltransferase)将5-甲基胞嘧啶(5-Methylcytosine, 5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-Hydroxymethylcytosine, 5hmC)分别转化为5-羧基胞嘧啶(5-Carboxyl cytosine, 5caC)和β-葡糖基-5羟甲基胞嘧啶(β-glucosyl-5 hydroxymethyl-cytosine, 5gmC)，5caC和5gmC因为经过修饰不能被APOBEC3A进行脱氨处理。第二步利用APOBEC3A脱氨酶对未修饰的胞嘧啶进行脱氨，将胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)，此步骤不会对5caC和5gmC造成影响，从而将两者区分开来。因此使用TET2、T4-BGT和APOBEC3A这三种酶可实现对5mC和5hmC的特异性检测[2]。

碧云天生产的Recombinant APOBEC3A (A3A)的酶活性检测效果请参考图1。

图1.碧云天Recombinant APOBEC3A (A3A) (D6751)催化胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶的效果图。在20μl体系中，加入含胞嘧啶(C)残基的单链DNA和图中指定量的本产品，以及相同量的Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)和Endonuclease VIII (D6781)，37ºC孵育过夜使胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶，然后利用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)催化尿嘧啶碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶产生一个脱嘧啶(Apyrimidinic, AP)位点，接着利用Endonuclease VIII (D6781)的AP裂解酶(AP-lyase)活性进行AP位点切除反应，反应完毕后立即放至冰上，并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)，随后用BeyoGel™ TBE-Urea PAGE 预制胶(15%) (R0243/R0244)进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品可将单链DNA中的胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶，且效果显著。反应体系(20μl)：20mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25ºC), 1mM DTT, 1mM EDTA, 30pmol含胞嘧啶(C)残基的单链DNA, 10U的Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)和Endonuclease VIII (D6781)，以及不同浓度的APOBEC3A (A3A)。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：胞嘧啶脱氨变成尿嘧啶；EM-seq和ACE-seq等DNA甲基化高通量测序；也可用于酶学动力学、抑制剂筛选和选择性分析。

来源：由大肠杆菌表达人源APOBEC3A基因，经纯化而获得。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶，纯度大于95%。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.4 @ 25ºC), 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.01% Tween-20, 50% Glycerol.

10X A3A Buffer: 200mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25ºC), 10mM DTT, 10mM EDTA.

失活或抑制：加入适量0.5% SDS或酚氯仿抽提可以使Recombinant APOBEC3A (A3A)失活。

-20ºC保存，至少两年有效。

使用本产品时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。