碧云天研发的环氧化酶-1(COX-1)抑制剂筛选试剂盒(Cyclooxygenase 1 Inhibitor Screening Kit，也称COX-1 Inhibitor Screening Kit)是一种利用荧光检测，简单、快速、灵敏地用于人COX-1抑制剂高通量筛选的试剂盒。

环氧化酶(Cyclooxygenase, COX)又称前列腺素内氧化酶合成酶(Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS)，是一种同时具有环氧化酶和过氧化氢酶活性的双功能酶。例如，COX的环氧化酶活性可以催化花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)转化为前列腺素G2 (Prostaglandin G2, PGG2)，而COX的过氧化氢酶活性又可以将前列腺素G2转化为前列腺素H2 (Prostaglandin H2, PGH2) [1,2]。

有两种常见的COX，一种是组成性表达的COX-1 (COX1)，另一种是诱导性表达的COX-2 (COX2)。哺乳动物的COX-1与COX-2的分子量相似，分别是70和72kDa，其氨基酸序列有65%同源，其中酶催化活性区域的氨基酸序列几乎一致。COX-1在很多组织中组成性表达，在胃粘膜、肾脏等中高表达，催化产生维持正常生理功能的前列腺素，从而参与血管舒缩、血小板聚集、胃粘膜血流、胃黏液分泌及肾脏功能等的调节。COX-2在正常生理状态下几乎不表达或表达很少，仅在脑、肾脏和生殖器官等中有一定水平的组成性表达。COX-2在巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和单核细胞等发生炎症反应时，可以被诱导表达。例如受炎性刺激物、损伤、有丝分裂原或致癌物质等促炎介质诱导后，COX-2的表达增高，从而参与多种病理生理过程。COX-3是COX-1的不同剪接体，和COX-1相比，COX-3多保留了一个内含子，在狗(dog)中该内含子的长度为93个碱基，而在人和小鼠中长度为94个碱基，因此在狗中COX-3是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3由于移码突变而没有酶活性[3]。

COX-1抑制剂的抗炎与抗血管生成作用在临床应用中有着良好的前景，在炎症和肿瘤研究中有着重要意义[4]，已成为药物研究的一个热点。例如SC-560,一种COX-1的选择性抑制剂，可以通过减轻缺氧和肺内分流来改善肝肺综合征(Hepatopulmonary syndrome, HPS) [5]，还可以与顺铂(Cisplatin)或紫杉醇(Taxol)联用抑制小鼠人卵巢癌异种移植模型的血管生成[6]。

本试剂盒的检测的基本原理参考图1。在辅助因子(Cofactor)存在的情况下，COX-1使用其环氧化酶(COX)活性把花生四烯酸等底物环氧化生成PGG2等中间产物，继而COX-1使用其过氧化物酶(Peroxidase)活性把PGG2等中间产物催化生成PGH2等最终产物，同时把几乎没有荧光的COX-1探针(Probe)催化生成有强荧光的探针(Ex560/Em590)。这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测COX-1的酶活性。如果在反应中加入COX-1抑制剂(Inhibitor)，荧光的生成就会被抑制，荧光强度与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。本反应生成的强荧光探针的最大激发波长为571nm，最大发射波长为585nm，推荐检测时的激发波长为560nm，发射波长为590nm。

图1.碧云天环氧化酶-1(COX-1)抑制剂筛选试剂盒(S0165)筛选COX-1抑制剂的原理图。Probe*表示催化生成的强荧光探针。

本试剂盒中提供了人重组COX-1 (recombinant human COX-1, rhCOX-1)、底物(Substrate)、辅助因子(Cofactor)、阳性对照COX-1抑制剂(SC-560)及可以被COX-1催化产生荧光的荧光探针(Probe)，并且对COX-1和底物的使用量进行了优化。

本试剂盒灵敏性好，且特异性强。本试剂盒不仅能检测出IC50很低的抑制剂，也能检测出IC50较高的抑制剂，而且特异性强，如图2所示，对COX-1特异性抑制剂SC-560的IC50约为5nM，而对COX-2特异性抑制剂Celecoxib的IC50达到10µM。碧云天同时提供环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒(S0168)。

图2.碧云天环氧化酶-1(COX-1)抑制剂筛选试剂盒(S0165)的抑制效果图。SC-560为COX-1的特异性抑制剂，Celecoxib为COX-2的特异性抑制剂。使用本试剂盒进行检测，对于COX-1，SC-560的IC50约为5nM，Celecoxib的IC50约为10µM。实测结果可能会因样品和检测条件等的不同而存在差异，图中数据仅作参考。

用于96孔板检测时，一个小包装的本试剂盒可以进行100次检测。

-20ºC保存，半年有效。其中COX-1 Probe和COX-1 Cofactor (50X)须避光保存。

COX-1 Probe在空气中不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中要注意适当避光。

COX-1 Probe的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，样品中带入到最终反应体系中的二硫苏糖醇(DTT)或者β-巯基乙醇的浓度须低于10µM。

请确保样品的pH值在7-8之间，或者确保加入样品后反应体系的pH值在7-8之间，否则会影响COX-1 Probe的稳定性和荧光值。

COX-1 Probe和COX-1 Assay Buffer需要完全解冻并回复至室温后再使用，否则会影响检测结果。rhCOX-1 (15X)使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。

COX-1 Substrate (500X)容易被氧化，请尽量避免长时间与空气接触。且在使用和储存过程中请注意保持低温，否则其稳定性可能会受到影响。

待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰，如无水乙醇和70%乙醇。推荐以COX-1 Assay Buffer、Milli-Q级纯水、DMSO为溶剂配制、稀释待测抑制剂，并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。

COX-1 Cofactor (50X)、COX-1 Substrate (500X)、rhCOX-1 (15X)等试剂的量均比较少，在使用前请先适当离心，然后适当混匀后再使用。

Substrate Buffer有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。