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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
pCMV-HA-p53
产品编号: D3033-1μg
产品包装:1μg
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价格: ¥ 888.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3033-1μg pCMV-HA-p53 1μg 888.00元
D3033-100μg pCMV-HA-p53 100μg 1169.00元

pCMV-HA-p53是碧云天自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达HA标签的人源p53(1-393aa)融合蛋白的质粒,可以方便使用抗HA标签的抗体来识别p53蛋白的表达,或进行免疫共沉淀(Co-IP)分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。

p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53),是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的p53是一个重要的抑癌基因,在抑制癌症发生过程中扮演重要的角色,因此被称为“基因组的守护者”。p53全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,1979年因其在SDS-PAGE凝胶电泳中展示的分子量约为53kDa而得名p53,这种分子量的差异源自于p53存在大量的脯氨酸残基,减缓了其在SDS-PAGE凝胶电泳中的迁移速度[1-2]。

pCMV-HA-p53质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 235-818
HA tag 904-930
human p53 943-2121
bGH poly(A) signal 2226-2450
f1 ori 2496-2924
SV40 promoter 2938-3268
Neomycin resistance gene 3335-4129
SV40 poly(A) signal 4303-4424
ori 4875-5463
Ampicillin resistance gene 5634-6494

pCMV-HA-p53质粒(6630bp)的图谱如下:

pCMV-HA-p53质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3033 pCMV-HA-p53.pdf

pCMV-HA-p53中没有的酶切位点包括:

AarI AbsI AccIII Acc65I AcvI AflII AgeI
AleI Aor13HI AscI AsiGI AsiSI Asp718I AsuNHI
BaeI BanIII BarI BbrPI BfrI BlpI BmtI
Bpu1102I Bsa29I BseAI BseCI BshVI BshTI BsiWI
BsmBI Bsp13I Bsp1407I Bsp1720I BspDI BspEI BspOI
BspTI BspXI BsrGI Bst98I BstAFI BstAUI BstEII
BstENI BstHPI BstPI Bsu15I BsuTUI CelII Cfr42I
ClaI CspAI Eco72I Eco91I EcoNI EcoO65I Esp3I
FseI FspAI HpaI I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI
KpnI Kpn2I KspI KspAI MauBI MreI MroI
MspCI MssI NheI OliI PacI PalAI Pfl23II
PI-PspI PI-SceI PinAI PmaCI PmeI PmlI PpuMI
Psp5II PspCI PspEI PspLI PspPPI PsrI RgaI
RigI SacII SanDI SbfI SdaI SfaAI SfiI
Sfr303I SgfI SgrBI SgsI SmiI SrfI Sse8387I
SspBI SstII SwaI Vha464I XagI

pCMV-HA-p53中的单酶切位点包括:

AhdI ApaI AvrII BamHI BbvCI BglII BmgBI
BssHII BstBI BstXI BstZ17I Bsu36I DraIII EcoRI
EcoRV HindIII KasI MfeI MluI NarI NdeI
NotI NruI PaeR7I PasI PflFI PfoI PluTI
PshAI PspOMI PspXI PvuI RsrII ScaI SexAI
SfoI SgrAI SgrDI SmaI SnaBI SpeI TspMI
Tth111I XbaI XhoI XmaI

pCMV-HA-p53质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

T7-F primer (863-882): 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'

SP6-R primer (2181-2200): 5'-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3'

pCMV-HA-p53的全序列信息:D3033 pCMV-HA-p53-全序列.txt

在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-HA-p53和pCMV-3X Flag-LTA(D3032),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(D3043)

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3033-1μg pCMV-HA-p53 1μg
D3033-100μg pCMV-HA-p53 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl,共400µl。可以直接用于转染细胞。
参考文献:
1.Levine AJ. Cell. 1997. 88(3):323-331.
2.Vogelstein B, Lane D, Levine AJ. Nature. 2000. 408(6810):307-310.
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D3031 pCMV-3X Flag-p53 1/100μg
D3032 pCMV-3X Flag-LTA 1/100μg
D3033 pCMV-HA-p53 1/100μg
D3036 pCMV-Myc-LTA 1/100μg
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