微信在线咨询
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2525-1μg | Pgrac100-C-His-Tet | 1μg | 888.00元 |
| D2525-100μg | Pgrac100-C-His-Tet | 100μg | 1169.00元 |
Pgrac100-C-His-Tet是碧云天研发的一种用于枯草芽孢杆菌表达C端含有His标签(His tag)的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒为大肠杆菌/枯草芽孢杆菌穿梭质粒，可在大肠杆菌中进行载体构建和扩增并在枯草芽孢杆菌中进行高水平外源蛋白表达。
本质粒含有Pgrac100强启动子和Lac操纵子，可以在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的基因表达[1, 2]。在多克隆位点内按照读码框的方向插入不带有终止密码子的目的基因，就可以表达C端带有His标签的目的蛋白。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是工业应用中一种重要的模式菌株，具有内毒素低、非致病性、遗传背景清晰、分泌蛋白能力强、容易分离培养等特性，是异源蛋白表达和分泌的理想宿主。由于从枯草芽孢杆菌中提取质粒和构建质粒较为困难，而在大肠杆菌中操作则更为简单方便，所以可通过构建大肠杆菌/枯草芽孢杆菌穿梭载体，先将外源目的基因在大肠杆菌中构建完成后再转入枯草芽孢杆菌中进行外源蛋白表达[3]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和四环素(Tetracycline, Tet)双抗性，在大肠杆菌中进行质粒扩增时，推荐氨苄青霉素筛选浓度为100μg/ml，在枯草芽孢杆菌中进行蛋白表达时，推荐四环素筛选浓度为15μg/ml [4]。
本质粒适用于转化枯草芽孢杆菌168∆4菌株(D0441)或WB800菌株(D0442)，在转化枯草芽孢杆菌感受态细胞时，建议做一组不转化质粒的阴性对照，防止出现抗生素浓度低，对宿主无效的情况。根据阴性对照实际情况，再适当调整抗生素的使用浓度。枯草芽孢杆菌转化推荐使用碧云天枯草芽孢杆菌感受态制备试剂盒(D0312)。
Pgrac100-C-His-Tet质粒(6507bp)的图谱如下：
Pgrac100-C-His-Tet质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| M13 fwd | 7-23 |
| lacI | 66-1148 |
| Pgrac100 | 1400-1522 |
| lac operator | 1477-1501 |
| Ribosome-binding site (RBS) | 1507-1514 |
| 8X His | 1568-1591 |
| Terminator | 1607-1632 |
| TcR (Tetracycline) | 1736-3112 |
| repB | 3319-4323 |
| AmpR promoter | 4819-4923 |
| AmpR | 4924-5784 |
| p15A ori | 5949-6494 |
Pgrac100-C-His-Tet的多克隆位点的详细图谱如下：https://www.beyotime.com/Manual/D2525 Pgrac100-C-His-Tet.pdf。
Pgrac100-C-His-Tet中没有的酶切位点包括：
| AasI | AbsI | AccIII | AcvI | AdeI | AfeI | AleI |
| AlfI | AloI | Aor13HI | Aor51HI | AscI | AsiSI | AspI |
| AspA2I | AvrII | AxyI | BaeI | BarI | BbrPI | BbuI |
| BbvCI | BlnI | BlpI | Bpu1102I | BsaBI | Bse8I | Bse21I |
| BseAI | BseJI | Bsp13I | Bsp68I | Bsp1407I | Bsp1720I | BspEI |
| BspLU11I | BspQI | BsrGI | BssNAI | Bst1107I | BstAUI | BstENI |
| BstZ17I | Bsu36I | BtuMI | CelII | Cfr42I | CpoI | CsiI |
| CspI | CspCI | DraIII | DrdI | DseDI | Eco47III | Eco72I |
| Eco81I | EcoNI | FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI |
| KflI | Kpn2I | KspI | LguI | MabI | MamI | MauBI |
| MreI | MroI | MroNI | MssI | NaeI | NgoMIV | NruI |
| OliI | PacI | PaeI | PalAI | PasI | PciI | PciSI |
| PdiI | PflFI | PI-PspI | PI-SceI | PmaCI | PmeI | PmlI |
| PscI | PspCI | PspXI | PsrI | PsyI | RgaI | RigI |
| RruI | RsrII | Rsr2I | SacII | SanDI | SapI | SbfI |
| SdaI | SexAI | SfaAI | SfiI | Sfr303I | SgfI | SgrAI |
| SgrBI | SgrDI | SgsI | SphI | SrfI | Sse8387I | SspBI |
| SstII | Tth111I | XagI | XmaJI |
Pgrac100-C-His-Tet中的单酶切位点包括：
| AarI | Acc65I | AflII | AgeI | AhdI | AlwNI | ApaI |
| BamHI | BfuAI | BglI | BglII | BmgBI | BmtI | Bpu10I |
| BsiWI | BsmI | BsmFI | BspDI | BspMI | BstAPI | BstBI |
| ClaI | EagI | Eco53kI | EcoO109I | FaqI | FspI | HindIII |
| KasI | KpnI | MscI | NarI | NdeI | NheI | NotI |
| NsiI | PaeR7I | PflMI | PfoI | PluTI | PpuMI | PshAI |
| PspOMI | PstI | PvuI | SacI | SalI | SfoI | SmaI |
| SnaBI | SpeI | StuI | SwaI | TspMI | XbaI | XhoI |
| XmaI |
Pgrac100-C-His-Tet质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
Forward primer (1366-1385): 5'-GACCTCGTTTCCACCGGAAT-3'
Reverse primer (1962-1980): 5'-AACAGCAGGAAGCTGGTGC-3
Pgrac100-C-His-Tet的全序列信息：D2525 Pgrac100-C-His-Tet全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2525-1µg | Pgrac100-C-His-Tet | 1µg |
| D2525-100µg | Pgrac100-C-His-Tet | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D0312 | 枯草芽孢杆菌感受态制备试剂盒 | 20次/100次 |
| D0441 | 枯草芽孢杆菌168∆4甘油菌 | 200μl |
| D0442 | 枯草芽孢杆菌WB800甘油菌 | 200μl |
| D2521 | Pgrac100-C-His-Cm | 1µg/100µg |
| D2522 | Pgrac100-amyQ-C-His-Cm | 1µg/100µg |
| D2523 | Pgrac100-N-His-WELQ-Cm | 1µg/100µg |
| D2524 | Pgrac100-amyQ-N-His-WELQ-Cm | 1µg/100µg |
| D2525 | Pgrac100-C-His-Tet | 1µg/100µg |
| D2526 | Pgrac100-amyQ-C-His-Tet | 1µg/100µg |
| ST2753 | 四环素盐酸盐(≥95%, Reagent grade) | 5g/25g/100g |
微信在线咨询
