碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit，即蛋白内毒素去除试剂盒，也称蛋白样品内毒素去除试剂盒或蛋白内毒素清除试剂盒，是一种能在15分钟内高效去除蛋白溶液样品中超过99%的内毒素的试剂盒。初始内毒素浓度为100EU/ml的蛋白样品，经本试剂盒处理后，内毒素含量可以低于0.1EU/ml，达到被认为是无内毒素污染的水平。因此本试剂盒在涉及细胞或动物等实验的样品去内毒素处理时有广泛应用[1,2]。

本试剂盒专门对于蛋白样品的内毒素去除进行了优化，也可用于核酸或小分子溶液样品的内毒素去除，但核酸样品的内毒素去除效果比蛋白的要略差一些。针对核酸的内毒素去除，推荐使用碧云天生产的DNA/RNA Endotoxin Removal Kit (D0035)或DNA/RNA Endotoxin Quick Removal Kit (D0036)。

内毒素(Endotoxin)，又名脂多糖(Lipopolysaccharides)，是革兰氏阴性细菌细胞壁中的主要成分，具有强烈的免疫活性和细胞毒性，极易对涉及动物实验或细胞实验等产生严重干扰。重组蛋白的表达纯化过程中，细菌裂解时会释放大量内毒素，其与蛋白的结合能力比较强，无法通过常规的蛋白纯化流程进行清除。因此，内毒素是重组蛋白生产过程中的常见污染物。传统的内毒素清除方法，如离子交换色谱法、超滤法、吸附法、疏水层析法等，通常存在内毒素清除效率低、成本高、处理时间长、操作复杂、蛋白量损失大、影响蛋白生物学活性等缺点，极大限制了无内毒素重组蛋白的生产[1,2]。

碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit可高效去除内毒素，能在15分钟内对内毒素浓度为100EU/ml-10,000,000EU/ml的蛋白样品完成内毒素清除处理，清除率均大于99%。本试剂盒用于清除蛋白溶液中内毒素的实验流程和效果请参考图1。

图1.碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit (C0268)用于清除BSA溶液中内毒素的实验流程图和效果图。图A为使用碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit用于清除BSA溶液中内毒素的实验流程图。称取15mg的BSA于1.5ml无内毒素离心管(FTUB306)中，使用500μl无内毒素的1X PBS (C0221B)进行溶解，配制成终浓度为30mg/ml的BSA溶液，此时溶液澄清透明，且内毒素含量较高；随后向BSA溶液中依次加入100μl的Endotoxin Removal Solution A、120μl Endotoxin Removal Solution B和1μl的Separation Indicator，涡旋振荡混匀，此时溶液变浑浊；4ºC孵育5分钟后溶液变澄清透明；随后37ºC孵育1分钟，溶液呈现乳白色浑浊；25ºC或室温，12,000-14,000g，离心5分钟，溶液呈现明显的无色水相与浅红色有机相分层；小心将上层水相转移至新的无内毒素的1.5ml离心管中，即完成对BSA溶液样品的内毒素清除处理。图B为内毒素清除处理前后的BSA溶液中内毒素含量显色反应效果图。使用碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法) (C0276)对内毒素清除处理前后的BSA溶液样品进行内毒素显色反应及含量检测，结果显示，内毒素清除处理前的BSA样品内毒素显色反应为紫色，指示其内毒素含量较高，经测定内毒素含量约为100EU/ml；经一次内毒素清除处理的BSA溶液样品内毒素显色反应为无色，指示其内毒素含量极低，经测定内毒素含量约为0.1EU/ml。此结果表明，本试剂盒可有效清除BSA样品中的内毒素。图C为内毒素清除处理前后的BSA溶液中蛋白含量电泳图。取10μl内毒素清除处理前后的BSA样品，加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F)，进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F)，拍照观察结果。实验结果显示，使用本试剂盒对BSA样品进行内毒素清除处理前后蛋白含量损失很少。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit用于不同内毒素含量的蛋白溶液进行内毒素清除处理的效率请参考图2。

图2.碧云天生产的Protein Endotoxin Removal Kit用于不同内毒素含量的BSA溶液进行内毒素清除处理的效率图。使用本试剂盒对500μl内毒素含量为1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107EU/ml的30mg/ml的BSA溶液样品，分别进行1-3次内毒素清除处理。结果显示，第1次内毒素清除处理的效率均≥99%，可有效将样品内毒素含量降低1000-2000倍；经1-3次内毒素清除处理后，可有效将样品内毒素含量降低1000-20000倍。以上实验结果均说明本试剂盒可实现高效清除蛋白样品中内毒素的目的。图中①、②、③分别表示不同初始内毒素浓度的样品分别进行的第一、第二和第三次内毒素清除处理；①、②、③下边的第一行数字为该次内毒素清除操作后样品中残留的内毒素含量，第二行数字为每次内毒素的清除百分率。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本试剂盒内毒素清除效率高、操作简单快捷。用户仅需将本试剂盒提供的Endotoxin Removal Solution按照一定比例加入到待处理的蛋白样品中，并通过特定温度孵育和离心操作，最快10-15分钟左右即可完成一轮内毒素清除处理；Endotoxin Removal Solution为即用型试剂，无需配制、稀释等步骤，可直接使用；在实测的内毒素含量为100EU-10,000,000EU范围内，内毒素清除率均>99%，可有效将样品内毒素含量降低1000-2000倍；经1-3轮内毒素清除处理后，可实现将样品内毒素含量降低1000-20000倍。

本试剂盒不影响蛋白质生物学活性，且样品损失量极低。本试剂盒提供的Endotoxin Removal Solution可高效清除蛋白样品中的内毒素，并极大地保留了蛋白质的生物学活性；且蛋白样品损耗量非常小，通常每次处理仅损失约1-5%的蛋白量；处理完毕后，蛋白样品中Endotoxin Removal Solution残留量极低，对大多数生物学实验无明显影响。

本试剂盒可处理样品体积范围宽。本试剂盒适用于几十微升到几十毫升的蛋白样品内毒素清除处理。

本试剂盒组分齐全。本试剂盒提供内毒素清除试剂Endotoxin Removal Solution A和B，水相和有机相分层颜色指示剂Separation Indicator，用户可根据实验要求自行选择使用。

一个小包装的本试剂盒共可以清除约100ml蛋白样品中的内毒素 (按照每次处理500μl样品，共可处理200个蛋白样品)；一个中包装的本试剂盒共可以清除约500ml蛋白样品中的内毒素 (按照每次处理500μl样品，共可处理1000个蛋白样品)。

-20℃保存，两年有效。4℃保存，3个月内有效。

本试剂盒不适用于处理含有高浓度甘油(≥10%)的蛋白样品。甘油会影响内毒素清除过程中水相与有机相分层的效果。

待处理的蛋白样品的浓度，通常不宜超过30mg/ml，具体可适用的最高蛋白浓度因蛋白性质不同而略有差异。浓度过高时，可以尝试将蛋白样品适当稀释后再使用本试剂盒进行内毒素清除处理。

实验所用的器皿须为无内毒素的。如果是常规的玻璃器皿，须经预处理以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250ºC干烤至少60分钟，也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。如果使用塑料器皿，应选用注明无内毒素并且对实验无干扰的器械。推荐选购碧云天的BeyoGold™系列耗材，通常可以认为是无内毒素污染的。

实验所用试剂及溶液均需为无内毒素，以免造成外源内毒素的污染。

实验操作过程应防止微生物的污染。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。