微信在线咨询
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| R0649S | Recombinant Human FTO Protein | 50μg | 898.00元 |
| R0649M | Recombinant Human FTO Protein | 200μg | 2598.00元 |
碧云天研发生产的Recombinant Human FTO Protein (EC 1.14.11.53)，也称Fat Mass and Obesity-associated Protein (FTO)，中文名为脂肪量和肥胖相关蛋白，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种RNA去甲基酶。FTO属于α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate, α-KG)和Fe(II)依赖的双加氧酶(Dioxygenase)家族，可以有效去除单链RNA的m6A甲基化修饰[1, 2]，还可以催化ssRNA中3-甲基尿嘧啶(m3U)和ssDNA中3-甲基胸腺嘧啶(m3T)的氧化去甲基化[3]。FTO对单链核酸具有偏好性，更倾向于ssDNA/RNA作为底物，首选底物是甲基化的RNA [4]。
FTO对ssDNA/RNA的m6A去甲基化的反应原理如下。FTO在体外以α-酮戊二酸和Fe(II)依赖的方式催化m6A去甲基化时，先将α-酮戊二酸转化为琥珀酸(Succinate)和CO2，生成不稳定的羟甲基，羟甲基再分裂成甲醛和去甲基化碱，并进一步转化为腺苷(Adenosine) [5]。
图1.FTO催化ssDNA/RNA的m6A去甲基化的反应图。
FTO基因仅存在于脊椎动物和海藻中，在脊椎动物的下丘脑、垂体和肾上腺中高表达[3, 6]，FTO蛋白定位于细胞核中[7]。FTO与一系列代谢和神经退行性疾病包括肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎和阿尔茨海默症等密切相关[8]；FTO内的单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphisms, SNPs)与肥胖以及子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌和黑色素瘤等癌症有关。此外，FTO还有具有调节脂肪生成的作用；多种癌症疾病包括急性髓性白血病、胶质母细胞瘤、宫颈鳞状细胞癌和黑色素瘤等都与FTO和m6A修饰失调相关[9]，因此FTO成为许多癌症精准医学的潜在靶点。
碧云天Recombinant Human FTO Protein去除ssDNA的m6A甲基化修饰的效果参考图2。
图2.碧云天Recombinant Human FTO Protein (R0649)对ssDNA的m6A修饰的去甲基化效果图。在20µl反应体系中，加入3µM的ssDNA和0/0.63/1.25/2.5µM FTO，25ºC孵育2小时。孵育结束后，取2.2µl (100ng ssDNA)反应产物滴至尼龙膜上，待样品风干后，进行紫外交联，然后用Wash Buffer洗涤3分钟，再用Blocking Buffer室温封闭2-3小时，之后将膜转移至N6-Methyladenosine (m6A) Rabbit Polyclonal Antibody (AF7407)中，4ºC孵育过夜。次日，用Wash Buffer室温洗涤4次，每次5分钟；随后将尼龙膜浸泡在适当稀释的辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) (A0208)溶液中，室温孵育1小时。然后用Wash Buffer室温洗涤4次，每次5分钟；最后用BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) (P0018A)进行化学发光，并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统记录化学发光效果。实验结果如图2所示，3µM的ssDNA用2.5µM FTO处理2小时，可以基本去除其中的m6A甲基化。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
用途：适用于FTO酶动力学、抑制剂筛选和选择性分析。
来源：大肠杆菌表达的人源FTO基因。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶储存溶液：150mM NaCl, 50% (v/v) Glycerol, 50mM HEPES (pH8.0 @ 25ºC).
失活或抑制：加入5mM EDTA，随后95ºC处理5分钟。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0649S-1 | Recombinant Human FTO Protein (1mg/ml) | 50µl |
| R0649S-2 | Reaction Buffer I (10X) | 250µl |
| R0649S-3 | Reaction Buffer II (10X) | 250µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0649M-1 | Recombinant Human FTO Protein (1mg/ml) | 200µl |
| R0649M-2 | Reaction Buffer I (10X) | 1ml |
| R0649M-3 | Reaction Buffer II (10X) | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，至少一年有效。
注意事项：本产品使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
由于涉及RNA和DNA操作，须严格按照RNA和DNA操作的规范进行，避免RNase和DNase污染。
实验中用到的吸头、离心管等实验耗材必须为RNase和DNase free的或须经DEPC处理，推荐选购碧云天的BeyoGold™系列中无RNase和DNase污染的耗材产品。不含RNase和DNase的超纯水推荐使用碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(DNase、RNase free) (R0021/R0022)。
桌面等环境以及仪器设备表面的RNase、DNase、RNA和DNA的去除推荐使用碧云天的RNase, DNase, RNA and DNA Away (R0127)进行快速处理。
可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如RNase Inhibitor、超纯水等。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Volume | Final Concentration |
| Nuclease-Free Water | (15.4-x)µl | - |
| Reaction Buffer I (10X) | 2µl | 1X |
| Reaction Buffer II (10X) | 2µl | 1X |
| ssDNA/RNA (100µM) | 0.6µl (60pmol) | 3µM |
| Recombinant Human FTO Protein (1mg/ml) | xµl | ≥0.136mg/ml (2.5µM) |
| Total Volume | 20µl | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| A0208 | 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) | 1ml |
| AF6936 | FTO Rabbit Polyclonal Antibody | 50µl |
| AF7407 | N6-Methyladenosine (m6A) Rabbit Polyclonal Antibody | 50µl |
| FFN10 | 尼龙膜(带正电荷, 进口分装, 7.5×8.25cm, 0.45μm) | 20张/包装 |
| FFN11 | 尼龙膜(带正电荷, 进口分装, 7.5×8.25cm, 0.45μm) | 100张/包装 |
| FFN13 | 尼龙膜(带正电荷, 进口分装, 15×16.5cm, 0.45μm) | 5张/包装 |
| FFN15 | 尼龙膜(带正电荷, 进口原装, 30cm×3.3m/卷, 0.45μm) | 1卷/包装 |
| L02605 | FTO基因敲除质粒 | 5µg |
| L02606 | FTO基因敲除慢病毒 | 108 TU |
| L02607 | FTO基因敲除HEK293T细胞 | 1支/瓶 |
| L02608 | FTO基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液 | 100µg |
| L02609 | FTO基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液 | 500µl |
| P0459 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 12%, 15孔) | 10/50块 |
| QH09073S | Human FTO qPCR Primer Pair | 200次 |
| QM06090S | Mouse Fto qPCR Primer Pair | 200次 |
| R0021 | DEPC水(DNase、RNase free) | 100ml |
| R0022 | DEPC水(DNase、RNase free) | 500ml |
| R0101 | RNase Inhibitor, Murine | 2/10/50/200kU |
| R0102 | RNase Inhibitor | 2000/10000/50000U |
| R0105 | RNase Inhibitor Plus, Human Placenta | 2/10/50/200kU |
| R0106 | RNase Inhibitor, Human Placenta | 2/10/50/200kU |
| R0125 | RNase, DNase and DNA Away | 250ml |
| R0127 | RNase, DNase, RNA and DNA Away | 250ml |
| R0639 | AlkB (RNA/DNA去甲基化酶, Nuclease-free) | 200/1000/5000U |
| R0641 | AlkB (D135S) (RNA m1G去甲基化酶, Nuclease-free) | 50/250/1250U |
| R0643 | AlkB (D135S/L118V) (RNA m22G去甲基化酶, Nuclease-free) | 50/250/1250U |
| R0649 | Recombinant Human FTO Protein | 50/200µg |
| ST476 | PBS (10X) | 500ml |
| ST876 | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 100ml/500ml |
微信在线咨询
