碧云天的Human Total MMP-3 ELISA Kit (Human Total MMP-3 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人总基质金属蛋白酶3酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的总MMP-3 (pro- and active)的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为54pg/ml，与人的MMP-1，MMP-2， MMP-7，MMP-8，MMP-9，MMP-13，TIMP-1均没有交叉反应，与人的MMP-10有2%的交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)又称为Matrixins，是锌和钙依赖的内肽酶家族，参与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的降解，在胚胎发育、形态发生、生殖和组织重塑等许多生理过程及关节炎、癌症和心血管疾病等病理过程中发挥重要作用。

基质金属蛋白酶3 (MMP-3)又称基质分解素1 (stromelysin-1)，是MMP家族的重要成员之一，全长477个氨基酸，分子量约为57kDa，活性部分分子量约为45kDa。依据结构特点，MMP-3可分为3个结构域：(1)氨基端前肽区：由信号肽(1-17aa)和前肽(18-99aa)组成。全长MMP-3称为pre-pro-MMP-3，信号肽可引导新合成的pre-pro-MMP-3向细胞膜运动；在翻译过程中信号肽被去除成为前体MMP-3 (pro-MMP-3)，而前肽“半胱氨酸开关”基序的半胱氨酸与Zn²⁺协调，以保持pro-MMP-3处于潜在的非活性形式；前体MMP-3被纤溶酶(plasmin)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)等蛋白水解酶切割去除半胱氨酸开关，而激活成活性MMP-3。(2)氨基末端催化区：由一个铰链区与氨基末端前肽区相连，含有Zn2+基序，为整个蛋白酶的活性部位；(3)羧基末端结构域：其氨基酸序列与血红素结合蛋白相似，是MMP-3与底物相结合的部位。MMP-3能够降解多种细胞外基质成分，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，释放E-钙粘蛋白(E-cadherin)，促进肿瘤侵袭转移，在肿瘤研究中日益受到重视。此外，MMP-3还参与组织形态发生、损伤修复、炎症反应等一系列生理、病理过程，在风湿性关节炎、动脉粥样硬化等疾病发生及进展过程中发挥重要作用。

研究表明，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者血清中MMP-3浓度明显高于健康患者，可作为类风湿性关节炎疾病活动性、影像学检测、疾病结局可预测性和治疗反应的可靠标志物。强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)也与MMP-3密切相关，MMP-3指标即可以反应AS患者关节骨质破坏，又能更好地反映疾病活动程度，可作为AS疾病进展与改善的血清学指标。此外，骨关节炎(osteoarthritis, OA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)、神经胶质瘤、眼部肿瘤、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、肝癌，甚至于新冠肺炎等疾病过程中亦伴随着MMP-3表达水平的变化。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人总MMP-3的浓度，其原理见图1。人MMP-3特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人MMP-3会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人MMP-3抗体后，生物素化抗人MMP-3抗体与人MMP-3结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人MMP-3浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。