碧云天生产的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase，即Q6U™高保真DNA聚合酶，是碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。它是一种以嗜热古细菌DNA聚合酶为基础通过突变等改造其“尿嘧啶结合口袋”而获得的能识别和扩增含有尿嘧啶(uracil)和次黄嘌呤(hypoxanthine)的模板DNA的超高性能DNA聚合酶，因此它除了具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12kb等优点之外，还可以利用dUTP (2'-deoxy-uridine 5'-triphosphate)和dITP (2'-deoxy-inosine-5'-triphosphate)进行基因扩增，其扩增效果请参考图1和图2。

碧云天的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase和NEB公司的Q5U™ HotStart High-Fidelity DNA Polymerase、Thermo公司的Phusion U Hot Start DNA Polymerase、Roche公司的KAPA HiFi HotStart Uracil+ Ready Mix (2X)有非常类似的扩增效果和用途。

Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase用于二代测序建库相关扩增时，具有扩增效率极高，低GC偏好性(low GC bias)等优良特性，特别适合用于亚硫酸处理的(bisulfite-converted)、脱氨基的(deaminated)或甲醛固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)等导致的损伤的(damaged) DNA样品的扩增，以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶(uracil-N-glycosylase, UNG)处理相结合可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。DNA长期保存会出现随机的Cytocine脱氨基现象，导致普通的DNA聚合酶无法扩增，而本产品可以兼容并扩增脱氨基的DNA^[1-3]。

Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶，它不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的聚合酶活性，同时还具有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)，它的错误发生概率比Taq酶低40-50倍，其扩增产物为平端(blunt end)，因此不能直接进行T载体克隆连接。如需用于T载体克隆，需在其扩增结束后加入常规量的普通Taq酶在72℃反应5-10分钟，使每条链的3'端加上一个A以形成粘端。

图1. 碧云天生产的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (简称Q6U™)和BeyoFusion™ DNA Polymerase (简称BeyoFusion)使用dUTP或dITP为底物扩增约1.2kbDNA片段的效果对比图。dUTP组的反应体系为50μl：5μl 10X Q6U™ Buffer或10X BeyoFusion™ Buffer，2μl Primers (10μM each)，5μl DdNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) (D7376)，1μl模板质粒(20ng/μl)，36μl Nuclease-free Water，冰上混合后加入1μl Q6U™或BeyoFusion™。dITP组的反应体系为50μl：5μl 10X Q6U™ Buffer或10X BeyoFusion™ Buffer，2μl Primers (10μM each)，5μl dNTP/dITP Mixture (2.5mM each + 0.25mM dITP)，1μl模板质粒(20ng/μl)，36μl Nuclease-free Water，冰上混合后加入1μl Q6U™或BeyoFusion™。按照说明书推荐的PCR程序反应完毕后，加入10μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，取5μl使用1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增效果。参考上图，Q6U™ DNA Polymerase可以高效利用dUTP和dITP为底物扩增目的片段，而BeyoFusion™ DNA Polymerase则完全不能。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

图2. 碧云天Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (简称Q6U)与N公司生产的同类产品(Competitor)利用dUTP和dITP扩增目的片段(约1.2kb)的效果对比图。Q6U使用图1中的反应体系，N公司产品使用其产品说明书推荐的反应体系，酶的用量为图中所标示的用量，U为活力单位。参考上图，碧云天Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase能很好地使用dUTP和dITP进行扩增，并且其扩增效果略优于国外N公司的同类产品。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

来源：Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase通过大肠杆菌重组、表达、纯化而获得。

用途：常规的DNA高效高保真扩增，特别适用于扩增亚硫酸处理的(bisulfite-converted)DNA样品用于DNA甲基化测序，特别适用于扩增脱氨基的(deaminated)或甲醛固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)等导致的损伤的(damaged) DNA样品的扩增，以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶(uracil-N-glycosylase, UNG)处理相结合可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 74℃。

纯度：不含DNA内切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：40mM Tris-HCl (pH7.5), 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 300µg/ml BSA and 50% (v/v) glycerol。

失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase失活。

-20℃保存，至少2年有效。

PCR反应非常灵敏，在进行扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。