产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D7211S | Hot-Start Taq DNA Polymerase | 200U | 93.00元 |
D7211M | Hot-Start Taq DNA Polymerase | 1000U | 373.00元 |
D7211L | Hot-Start Taq DNA Polymerase | 5000U | 1489.00元 |
碧云天生产的Hot-Start Taq DNA Polymerase是一种仅当温度高于45℃时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(简称Taq酶)与其可逆抑制剂的混合物,俗称热启动Taq酶或HS Taq酶。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作,并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。
碧云天的Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶与其可逆性抑制剂的混合物。该抑制剂可以可逆性地结合于Taq酶活性位点,当温度低于45℃时,形成非活性的Taq酶和抑制剂的复合物,从而抑制了Taq酶的活性。在常规PCR反应过程中,当温度升高至45℃或以上时,Taq酶和其可逆性抑制剂解离,从而发挥其正常的DNA聚合酶活性。上述机制使Hot-Start Taq DNA
Polymerase仅在加热到45℃或以上时才会有酶活性,从而确保了小于45℃时不会发生非特异性的DNA聚合反应,有效降低了PCR的非特异性背景,提高了PCR反应的准确性和精确性。
常规的DNA分离纯化操作,例如PCR纯化试剂盒或DNA凝胶回收试剂盒和乙醇沉淀等操作,都能有效去除本产品中的抑制剂,以避免可能的对于后续反应的干扰。
Hot-Start Taq DNA Polymerase使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性。
Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一样,可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的DNA的聚合反应,没有3'至5'的外切酶活性,最终会导致PCR产物的3'末端产生3'-dA overhangs,即产生带一个A的3'粘端,可直接用于TA克隆。
图1. Hot-Start Taq DNA Polymerase的酶活力测定。A. Hot-Start Taq DNA Polymerase (HS Taq)在40℃时,其聚合酶活力完全被抑制。以M13 mp18 ssDNA (7249nt,电泳显示约2.2kb)为模板,添加适量引物后40℃孵育10min,1% Agarose凝胶电泳。图中可见普通Taq酶在40℃可以发生聚合反应,使DNA条带延长至电泳呈现的约3.5kb大小,而Hot-Start Taq酶(HS Taq)完全不能使M13 mp18 ssDNA的链发生延长,即其酶活力完全被抑制。B. Hot-Start Taq DNA Polymerase在常规PCR条件下其活力完全被释放,PCR扩增效果和Taq酶完全一致。
来源:本产品使用的Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
用途:高背景和有非特异性条带的PCR,高专一性PCR(high-specificity PCR),高灵敏度PCR,生物芯片分析(microarray
analysis),常规PCR,克隆PCR、TA克隆等,不建议用于荧光定量PCR (qPCR)。
活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10X Hot-Start PCR Buffer:100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet
P40。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活,加入脱氧胆酸钠至0.06%,SDS至0.01%,或
sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。
本产品用于50微升的PCR反应体系,足够用于4000个反应;用于20微升的PCR反应体系,足够用于10000个反应。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7211L-1 | Hot-Start Taq DNA Polymerase (2.5U/μl) | 5000U |
D7211L-2 | 10X Hot-Start PCR Buffer | 10ml×2 |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Hot-Start Taq Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
Hot-Start Taq DNA Polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5,对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA Polymerase、BeyoTaq DNA Polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测,Hot-Start Taq DNA Polymerase是最佳选择。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
试剂 | 最终浓度 | 体积 |
双蒸水或Milli-Q水 | - |
(36.5-x)μl |
10X Hot-Start PCR Buffer | 1X |
5μl |
dNTP (2.5mM each) | 0.2mM each |
4μl |
模板DNA |
10pg-1μg* |
xμl |
引物混合物(10μM each) | 0.8μM |
4μl |
Hot-Start Taq DNA Polymerase (2.5U/μl) | 1.25U/50μl |
0.5μl |
总体积 | - |
50μl |