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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7166 | BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) | 10次 | - |
BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)，即BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H minus)是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)，用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生
cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)的情况下，由于缺失了RNase H，RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解，这样反转录出来的cDNA的长度就会更长，并且产量更高。
试剂盒中提供了RNase Inhibitor，确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。
试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物，前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录，后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
试剂盒中提供的Control Primer为17聚，即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的
1.1kb RNA。
使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时足够进行10个cDNA第一链样品的合成。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7166-1 | BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)(200U/μl) | 2000U |
| D7166-2 | Reaction Buffer(5X) | 50μl |
| D7166-3 | RNase Inhibitor(20U/μl) | 10μl |
| D7166-4 | dNTP Mix(10mM each) | 20μl |
| D7166-5 | Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl) | 10μl |
| D7166-6 | Random Hexamer Primer(0.2μg/μl) | 10μl |
| D7166-7 | Control RNA(20ng/μl) | 6μl |
| D7166-8 | Control Primer(5pmol/μl) | 6μl |
| D7166-9 | DEPC-treated Water | 0.2ml |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
对于GC含量比较高的RNA的反转录，试剂盒的使用说明中给予了特别说明，请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesi)：
a. 参考如下表格设置反转录反应：
| 模板(后面4种任选一种) | Total RNA | 0.01-5μg |
| 或Poly(A) RNA/mRNA | 1-500ng | |
| 或Specific RNA | 0.01pg-500ng | |
| 或Control RNA | 2μl | |
| 引物(后面3种任选一种) | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 1μl |
| Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 1μl | |
| Gene specific primer | 15-25pmol | |
| DEPC-treated Water | － | To 12μl* |
| 70℃孵育5分钟，随后立即放置到冰浴冷却，4℃微离心，随后加入下述试剂** | ||
| Reaction Buffer (5X) | － | 4μl |
| RNase Inhibitor (20U/μl) | － | 1μl |
| dNTP Mix (10 mM each) | － | 2μl |
| BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-) | － | 1μl |
| 总体积 | 20μl | |
*To 13.7μl表示加入DEPC-treated Water至最终体积为13.7μl。
70℃孵育5分钟并且随后冰浴冷却，这样可以使RNA模板的二级结构充分打开。
b. 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物，在42℃孵育60分钟。如果使用random hexamer(随机六聚体)作为引物，先在25℃孵育10分钟，随后在42℃孵育60分钟。
注意：对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应，可以设置为45℃孵育60分钟。
d. 70℃孵育10分钟以失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)并终止反转录反应。
说明：对于长片断的cDNA不推荐采用加热的方法失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)，这种操作可能会导致部分长片断DNA被剪切。
e. 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应，也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应时，如果PCR的反应体系为50微升，则推荐使用2微升反转录产物。
2. 其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶(RNase H-)的相关文献资料进行。
常见问题：
1. RNA反转录产物电泳观察不到。
反转录产物由于是从模板反转录而获得，而模板的量本身比较低，反转录的量通常还要少于模板量，因此通常RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。
2. 反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增，看是否可以成功扩增。如果可以成功，则说明PCR扩增体系没有问题，此时通常是目的基因的引物设计欠佳，当然也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增，则有可能PCR体系存在问题或反转录产物质量欠佳。
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