使用说明：
1.用于降低细胞、组织或细菌裂解液的粘度。
a.对于培养细胞样品：
(a)对于贴壁细胞：吸除细胞培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。每1ml RIPA裂解液(P0013B/C/D)、Western及IP细胞裂解液(P0013/P0013J)或其它细胞裂解液中加入0.5-5μl本BeyoZonase™超级核酸酶，然后按照裂解液的使用说明用于贴壁细胞的裂解。加入含有BeyoZonase™超级核酸酶的裂解液后，冰浴或室温孵育5-30分钟，收集裂解液，10,000-14,000×g离心3-5分钟，取上清，即可用于后续的PAGE、Western和免疫沉淀等实验。
(b)对于悬浮细胞：250-1000×g室温离心5min，吸除上清，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)，再离心收集细胞，轻轻vortex或者弹击管底以把细胞尽量分散开。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再用于后续的裂解。每1ml RIPA裂解液(P0013B/C/D)、Western及IP细胞裂解液(P0013/P0013J)或其它细胞裂解液中加入0.5-5μl本BeyoZonase™超级核酸酶，然后按照裂解液的使用说明用于贴壁细胞的裂解。加入含有BeyoZonase™超级核酸酶的裂解液后，冰浴或室温孵育5-30分钟，10,000-14,000×g离心3-5分钟，取上清，即可用于后续的PAGE、Western和免疫沉淀等实验。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔贴壁细胞或每100万动物细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高或者细胞比较大的情况，可以适当加大裂解液的用量到150-250微升。
b.对于组织样品：
(a)把组织剪切成细小的碎片。
(b)按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入RIPA裂解液(P0013B/C/D)、Western及IP细胞裂解液(P0013/P0013J)或其它细胞裂解液，同时加入0.5-5μl本BeyoZonase™超级核酸酶。
(c)用玻璃匀浆器匀浆，或使用TissueMaster™手持式组织研磨仪 (E6600)、TissueMaster™高通量组织研磨仪(E6618) 进行研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
(d)充分裂解后，冰浴或室温孵育5-30分钟，10,000-14,000×g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
(e)如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。
c.对于细菌或酵母样品：
(a)对于1ml菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻vortex或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升RIPA裂解液(P0013B/C/D)或其它细胞裂解液，同时加入0.5-5μl本BeyoZonase™超级核酸酶。
(b)轻轻vortex或者弹击管底以混匀，冰浴或室温孵育5-30分钟。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用裂解液进行裂解。
注：碧云天的RIPA裂解液(P0013B/C/D)、Western及IP细胞裂解液(P0013/P0013J)含有不同浓度的Triton X-100或NP-40、SDS及脱氧胆酸钠等(具体参见https://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm)，对酶活性有一定的影响，所以需要适当增加酶量或延长孵育时间。
2.去除重组蛋白中的核酸：
重组蛋白生产时对核酸残留有严格的要求，很多情况可以参考如下描述以去除残留的核酸。生物样品中DNA浓度范围通常在0.5-5μg/ml之间，如下采用高负荷DNA浓度50μg/ml的鲱鱼精子DNA溶液进行的测试，反应缓冲液为50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM MgCl₂, 0.1 mg/ml BSA。
a.37℃反应22h，反应液中BeyoZonase™超级核酸酶终浓度为90U/ml时，可降解所有DNA；反应液中BeyoZonase™超级核酸酶终浓度为9U/ml时，可降95%的DNA；
b.反应液中BeyoZonase™超级核酸酶终浓度为90U/ml时，23℃反应30h可降解所有DNA；0℃反应30h可降解99%的DNA；
c.样品在10mM Tris (pH8.0)缓冲液中，反应液中BeyoZonase™超级核酸酶终浓度为90U/ml时，23℃反应22h可降解所有DNA；样品在PBS缓冲液中，反应液中BeyoZonase™超级核酸酶终浓度为0U/ml时，23℃反应30h可降95%的DNA。
3.去除重组病毒中的核酸：
对于在细胞中包装生产的重组病毒，在收集的细胞上清中直接加入BeyoZonase™超级核酸酶，使之终浓度约为1U/ml，30-34℃反应4-8h，即可有效地将宿主细胞的核酸(DNA及RNA)降解为3-5bp的核酸片段。
4.实时定量PCR法测定重组病毒滴度时去除核酸干扰：
在检测重组病毒滴度时，BeyoZonase™超级核酸酶可以去除病毒上清中基因组DNA、RNA和质粒等核酸干扰，通过在载体的长末端重复序列区(LTR)设计引物，利用荧光实时定量PCR测定重组病毒中LTR拷贝数来测定病毒颗粒数。建议在PCR管中按照下表体系进行设置，37℃孵育30min去除核酸后，再对样品进行梯度稀释并实时定量PCR检测。BeyoZonase™超级核酸酶终浓度1-5U/ml，Reaction Buffer: 10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl₂, 0.1% PEG8000, 0.1mg/ml BSA.

Component	Volume
Sample (μl)	5
BeyoZonase™ (0.01-0.1U) (μl)	x
Reaction Buffer (μl)	50-x
Total Volume (μl)	50

5.防止细胞成团：
BeyoZonase™超级核酸酶加入细胞培养液中可以防止细胞成团，特别是在解冻细胞时。例如全血分离的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)解冻后易聚集在一起，影响后续分析和检测。如果在PBMCs冻存液中加入终浓度为50U/ml的BeyoZonase™超级核酸酶可以有效防止细胞成团。BeyoZonase™超级核酸酶不仅没有蛋白酶的活性，而且不会对健康细胞造成伤害，因此是防止细胞成团的理想选择。
6.降低大肠杆菌裂解液粘度，改善纯化过程中离心难、过滤难的问题：
大肠杆菌高密度发酵在增加菌密度的同时提高了重组蛋白的表达量，但是大肠杆菌破碎后释放的基因组DNA会导致裂解液粘度大，加大了离心和澄清过滤的难度。
按照0.2g湿菌用1ml细菌裂解液重悬菌体，使用高压破碎仪1500bar，4℃进行均质破碎。如果加入终浓度为25U/ml的BeyoZonase™超级核酸酶，15℃反应15min，与不加BeyoZonase™超级核酸酶的细菌裂解液相比粘度降低50%；如果加入终浓度为2.5U/ml BeyoZonase™超级核酸酶，15℃反应30min，与不加BeyoZonase™超级核酸酶的细菌裂解液相比粘度降低37%。
采用混纤膜(MCE)和聚醚砜膜(PES)，孔径分别为0.4μm和0.8μm的滤膜进行澄清测试，不加BeyoZonase™超级核酸酶的细菌裂解液几乎立即堵塞了滤膜，而终浓度为25U/ml的BeyoZonase™超级核酸酶处理过的细菌裂解液，在过滤时间为20s后，0.8μm孔径的膜通量可以达到7400L/m2h，0.45μm孔径的膜通量可以达到4200L/m2h。对于孔径较小的0.22μm滤膜，即使在用25U/ml BeyoZonase™超级核酸酶消化后，过滤时也会立即发生堵塞，如果一定需要使用0.22μm滤膜过滤细菌裂解液，建议先用聚醚砜膜(PES)材质0.45μm孔径的滤膜过滤后再用0.22μm滤膜过滤，或者需要加大酶的用量或延长孵育时间。
7.提高包涵体蛋白复性率：
在大肠杆菌中以包涵体形式表达重组蛋白的方法，因其表达量高、蛋白纯度高、免受蛋白酶降解和可表达对宿主细胞有毒的蛋白而广泛应用。在包涵体蛋白变性后复性，即重折叠的过程中，由于细菌裂解液中大量的DNA可能会粘附蛋白酶，导致目的蛋白的降解，如果在细菌裂解液中加入终浓度为1U/ml BeyoZonase™超级核酸酶，37℃反应30min，即可有效降低由于基因组DNA而粘附的蛋白酶，提高包涵体的纯度，最终提高包涵体蛋白复性率。
8.二维凝胶电泳样品的制备：
二维凝胶电泳用于分离复杂的蛋白质混合物，分辨率高。核酸是带负电荷的分子，可以与蛋白质表面带正电荷的区域相互作用形成复合物，这种核酸-蛋白质复合物的形成和形状很难预测。与纯蛋白质相比，这些核酸-蛋白质复合物在电场中的迁移方式不同，可能会导致蛋白质条带偏移，使二维凝胶电泳的分辨率差。如果按照每100μl细胞裂解液加入50U的BeyoZonase™超级核酸酶对样品进行预处理，可减少水平条纹，显著提高二维凝胶电泳分离的分辨率。另外，因为所需酶量较少，所以无需担心BeyoZonase™超级核酸酶的使用对二维凝胶电泳的结果的影响。
常见问题
1.在使用过程中，应在哪一步加入BeyoZonase™超级核酸酶？
如果“使用说明”中没有相应的操作，一般是在培养后、捕获样品步骤之前添加。
2.在低温条件下，应在加入多少BeyoZonase™超级核酸酶？
温度低于37℃时，BeyoZonase™超级核酸酶的效率会降低，通常情况下，在不增加BeyoZonase™超级核酸酶使用量的情况下，可以通过延长孵育时间来补偿低温时的酶切效率低。
3.为什么BeyoZonase™超级核酸酶不起作用？什么会抑制BeyoZonase™超级核酸酶的活性？
BeyoZonase™超级核酸酶在很宽泛的条件下都有酶活性，但是Mg²⁺是BeyoZonase™超级核酸酶的关键催化辅助因子，反应液含有1-2mM Mg²⁺对BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性是必须的。Mn2+可以替代Mg²⁺，但是只有在Mg²⁺存在的情况下，酶才能达到最佳的活性。如果阳离子浓度>300mM、磷酸盐浓度>100mM、硫酸铵浓度>100mM或者>1mM EDTA的情况下，BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性会受到抑制。
4.为什么BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性下降？
通常来说BeyoZonase™超级核酸酶是十分稳定的，在极少数情况下酶活性下降。不可逆的酶失活可能是由于样品中存在变性剂、蛋白酶或者-80℃冻融；可逆的酶失活可能是因为存在螯合剂(如EDTA)或去除了BeyoZonase™超级核酸酶的关键催化辅助因子Mg²⁺。
5.不小心将BeyoZonase™超级核酸酶在室温放置了2天还能用吗？
本BeyoZonase™超级核酸酶非常稳定。即使在37℃保存数周，BeyoZonase™超级核酸酶也能保持>90%的酶活性，在25℃保存10周后，酶活性基本没有变化。
6.如何抑制BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性？
在阳离子浓度>300mM、磷酸盐浓度>100mM、硫酸铵浓度>100mM或者>1mM EDTA的情况下，BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性会受到抑制，但这些都是可逆的酶失活。只有在极端条件下(100mM NaOH，70℃处理30min)才能实现不可逆的酶失活。
7.如何去除BeyoZonase™超级核酸酶？
可以通过下游纯化操作来完成，如澄清液的深度过滤、浓缩的切向流过滤(TFF)、浓缩和色谱层析(如离子交换、分子筛、疏水层析)。对于D7126 BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)可以通过镍柱吸附去除。
8.BeyoZonase™超级核酸酶是否具有蛋白酶活性?
否。BeyoZonase™超级核酸酶没有检测到蛋白酶活性，因此在其“工作”期间不会降解目的蛋白。但是如果样品中存在蛋白酶，可能会导BeyoZonase™超级核酸酶的不可逆降解。
9.BeyoZonase™超级核酸酶是否与蛋白酶抑制剂兼容?
是。但是，由于许多蛋白酶抑制剂中含有EDTA，而>1mM EDTA的情况下BeyoZonase™超级核酸酶的酶活性会受到抑制，因此应谨慎使用。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D7121-5KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)	5KU
D7121-25KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)	25KU
D7121-100KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)	100KU
D7121-500KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)	500KU
D7121-2000KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)	2000KU
D7126-5KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)	5KU
D7126-25KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)	25KU
D7126-100KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)	100KU
D7126-500KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)	500KU
D7126-2000KU	BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)	2000KU