碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)，简称T4 PNK (3' phosphatase minus)，即T4多聚核苷酸激酶(3'磷酸酶活性缺失)，是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其它NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。

与T4 Polynucleotide Kinase相比较，T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)缺失了3'磷酸酶活性，即不能催化3'端磷酸化多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi (最适pH为5.9左右)。

T4 PNK (3' phosphatase minus)特别适用于把OH-DNA/RNA-p催化转变为p-DNA/RNA-p，或把Np催化转变为pNp。

碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)催化单链DNA 5'端磷酸化的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)催化单链DNA 5'端磷酸化的效果图。使用本产品或本公司的T4 Polynucleotide Kinase，在50µl反应体系中加入图中指定量的本产品或碧云天的T4 Polynucleotide Kinase，37℃孵育30分钟进行反应，65℃孵育20分钟以终止反应。取出20μl反应液，用增强型ATP检测试剂盒(S0027)检测反应体系中剩余ATP的浓度，根据反应体系中剩余ATP的浓度计算出反应体系中剩余ATP的量，根据反应体系中剩余ATP的量和初始加入的总量计算出反应体系中消耗掉的ATP量，消耗掉的ATP量可以反映T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性。以反应体系中加入的酶量为横坐标，消耗掉的ATP量为纵坐标作图。如图所示，本产品与T4 Polynucleotide Kinase (D7096/D7097/D7098)相比，具有类似的催化单链DNA 5'端磷酸化效果。反应体系(50μl): 70mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃), 10mM MgCl₂, 5mM DTT, 2µM ATP, 2µM ssDNA，以及加入1µl不同浓度的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的效果请参考图2。

图2.碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的效果图。使用本产品或碧云天的T4 Polynucleotide Kinase，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或碧云天的T4 Polynucleotide Kinase，37℃孵育30分钟进行反应，65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μl反应液，用磷酸根荧光检测试剂盒(S0192 Phosphate Sensor Assay Kit)检测反应体系中的荧光信号，根据荧光信号的强弱可知磷酸根的多少，荧光信号越显著，则磷酸根越多，磷酸根越多，则说明T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase具有显著的磷酸酶活性；反之则没有磷酸酶活性。以反应体系中加入的酶量为横坐标，检测到的荧光值为纵坐标作图。如图所示，本产品不具有催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的活性，而T4 Polynucleotide Kinase具有催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的活性。反应体系(20μl): 70mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃), 10mM MgCl₂, 5mM DTT, 15µM ssDNA (3'端磷酸化)，以及加入1µl不同浓度的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记；寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，产生的底物pNp可以和DNA或RNA的3'末端连接；催化3'磷酸化的寡核苷酸的5'末端标记。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体T4 Polynucleotide Kinase的突变体。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme catalyzing the incorporation of 1 nmol of phosphate from ATP to 5’-OH DNA in 30 minutes at 37℃。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH7.4), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1µM ATP, 50% glycerol。

T4 PNK Buffer (10X)：700mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃), 100mM MgCl₂, 50mM DTT。

缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X G、1X O、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X R中的活性为75-100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为50-100%。

失活或抑制：75℃加热10min或65℃加热20分钟可使T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)的活性。

-20℃保存，至少2年有效。

铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)的酶活性。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。