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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7096 | T4 Polynucleotide Kinase | 100U | 116.00元 |
| D7097 | T4 Polynucleotide Kinase | 500U | 496.00元 |
T4 Polynucleotide Kinase，简称T4 PNK，中文名称T4多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。
上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。
当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP。
T4 Polynucleotide Kinase同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。
T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端连接；去除3'端磷酸基团。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，
0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl2，50mM DTT，
1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X G、1X O、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X R中的活性为75-100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为50-100%。
失活或抑制：75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7096-1 | T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl) | 100U |
| D7096-2 | Reaction Buffer A(10X) | 80μl |
| D7096-3 | Reaction Buffer B(10X) | 40μl |
| D7096-4 | 24% PEG Solution | 40μl |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. DNA 5'末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
| Reagent | Volume |
| 待磷酸化DNA | 1～20pmol(5'末端) |
| Reaction Buffer A(10X) | 2μl |
| [γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol) | 20pmol |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至19μl |
| T4 Polynucleotide Kinase (10U/μl) | 1μl |
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
2. DNA 5'末端磷酸化：
a. 参考如下表格设置反应体系：
| Reagent | Volume |
| 待磷酸化DNA | 1～20pmol(5'末端) |
| Reaction Buffer A (10X) | 2μl |
| 0.1mM ATP | 1μl |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至19μl |
| T4 Polynucleotide Kinase (10U/μl) | 1μl |
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
3. 通过交换反应(exchange reaction)进行DNA 5'末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
| Reagent | Volume |
| 待磷酸化DNA | 1～20pmol (5'末端) |
| Reaction Buffer B (10X) | 2μl |
| [γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol) | 40pmol |
| 24% PEG Solution | 4μl |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至19μl |
| T4 Polynucleotide Kinase (10U/μl) | 1μl |
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
4. 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。
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