碧云天研发生产的Bst 8.0 DNA Polymerase，是一种Bst DNA Polymerase, large fragment (D7050)的同源蛋白，即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA聚合酶大片段的同源蛋白，和Bst DNA Polymerase大片段相比，具有更强的5′→3′DNA聚合酶活性、更强的链置换(Strand displacement)能力、dUTP耐受性、耐盐性以及非离子去垢剂耐受性。Bst 8.0 DNA Polymerase不具有5′→3′和3′→5′的核酸外切酶活性，可应用于环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)、交叉引物扩增技术(Crossing priming amplification, CPA)、滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)和基于滚环扩增的等温扩增反应等。Bst 8.0 DNA Polymerase介导的等温扩增温度一般在50-72ºC之间，通常为65ºC，最佳温度与所使用的引物和扩增的产物有关，需要通过实验进行优化。

本产品与同类公司的Bst 3.0 DNA Polymerase相比，不仅具有相当的DNA聚合酶活性(图1)、链置换能力、dUTP耐受性和耐高温特性(可耐受72ºC)(图2)；并具有更好的逆转录酶活性和更强的dUTP耐受性(图3和图4)，可应用于逆转录环介导的等温扩增(Reverse Transcription Loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)。

本产品具有Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)的所有优秀特性；与Bst 6.0 DNA Polymerase相比，本产品不仅具有相当的DNA聚合酶活性(图1)、链置换能力、耐盐性和非离子去垢剂耐受性，还具有更好的耐高温特性(可耐受72ºC)(图2)、更好的逆转录酶活性和更强的dUTP耐受性(图3和图4)。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65ºC。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase酶活性效果参考图1。本产品与N公司(Competitor)的产品和Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)相比，在反应达到平台期时(反应1小时)具有相当的扩增效果。

图1. 碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)进行环介导等温扩增(LAMP)反应的效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用不同剂量的碧云天的本产品、Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO₄)中补加MgSO₄至终浓度为8mM，65ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品和Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)相比，在反应达到平台期时(反应1小时)具有相当的扩增效果。-，仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照；M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase在酶量相当的情况下，与N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase相比，其实时荧光定量环介导等温扩增(LAMP)具有更快的反应速度，并且即使在酶量饱和的情况下也比N公司的同类产品具有更快的反应速度(图2)。

图2. 碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase与N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase相比，在酶量相当或酶量饱和的情况下，其实时荧光定量环介导等温扩增(LAMP)都具有更快的反应速度。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用相同量的本产品和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，进行实时荧光定量LAMP反应(PCR程序：65ºC 15s，65ºC 45s (采集信号)；溶解曲线程序：95ºC 15s，65ºC 15s，95ºC 15s)。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增(LAMP)反应可耐受72ºC高温的效果图参考图3。

图3. 碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)进行环介导等温扩增(LAMP)反应的耐高温(72ºC)效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用不同剂量的本产品、Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，72ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有类似的耐高温(72ºC)特性；与Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)的产品相比，具有更佳的耐高温特性(72ºC)。-, 仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照；M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase进行实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)具有更快的反应速度(图4)。

图4. 碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)进行实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)的效果图。在25μl体系，以相同病毒滴度(2×103IU)的RNA病毒(新冠病毒(2019-nCoV)的N基因假病毒(C3021))为模板，使用相同量的本产品、Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，进行实时荧光定量RT-LAMP反应(PCR程序：65ºC 15s，65ºC 45s (采集信号)；溶解曲线程序：95ºC 15s，65ºC 15s，95ºC 15s)。如图所示，碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)和Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)比N公司(Competitor)的产品具有更快的反应速度。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase进行实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)可耐受高浓度的dUTP(图5)。

图5. 碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)进行实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)的高dUTP耐受性的效果图。在25μl体系，以相同病毒滴度(2×103IU)的RNA病毒(新冠病毒(2019-nCoV)的N基因假病毒(C3021))为模板，使用相同量的本产品、Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop B，1.4mM dNTP each，1.4mM dUTP，0.04U UDGase (D7360)，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，进行实时荧光定量RT-LAMP反应(PCR程序：65ºC 15s，65ºC 45s (采集信号)；溶解曲线程序：95ºC 15s，65ºC 15s，95ºC 15s)。如图所示，碧云天Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)和Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)比N公司(Competitor)的产品在相同高dUTP浓度(1.4mM dUTP)时具有更快的反应速度，即更好的耐受性，其中Bst 8.0 DNA Polymerase (D7048)效果最佳。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase与N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase相比，在酶量相当或酶量饱和的情况下，其实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)具有更快的反应速度(图6)。

图6. 碧云天生产的Bst 8.0 DNA Polymerase与N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase相比，在酶量相当或酶量饱和的情况下，其实时荧光定量逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)具有更快的反应速度。在25μl体系，以相同病毒滴度(2×103IU)的RNA病毒(新冠病毒(2019-nCoV)的N基因假病毒(C3021))为模板，使用相同量的本产品和N公司(Competitor)的Bst 3.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 8.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，进行实时荧光定量RT-LAMP反应(PCR程序：65ºC 15s，65ºC 45s (采集信号)；溶解曲线程序：95ºC 15s，65ºC 15s，95ºC 15s)。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

来源：Bst 8.0 DNA Polymerase通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。

纯度：无DNA内切酶和外切酶活性。

用途：环介导等温扩增(LAMP)、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP) (反应温度可达72ºC)、交叉引物扩增技术(CPA)、滚环扩增(RCA)和解旋酶等温扩增(HDA)等DNA等温扩增，多重置换扩增(MDA)，链置换DNA合成，全基因组扩增(WGA)，高GC含量的DNA的测序，纳克级DNA模板的快速测序，建库测序等。

酶储存液：10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 7.5 @ 25ºC）。

10X Bst 8.0 Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2S04, 20mM MgS04, 1% Tween-20 (pH 8.8 @ 25ºC)。

失活或抑制：80ºC加热5分钟可使Bst 8.0 DNA Polymerase失活。

-20ºC保存，两年有效。

Bst 8.0 DNA Polymerase不具有5′→3′的核酸外切酶活性。

建议等温扩增反应温度不能高于72ºC，否则会导致酶较快速度失活。

Bst 8.0 DNA Polymerase不能用于热循环测序或PCR。

每次等温扩增实验建议设置仅无模板DNA的阴性对照，以排除背景性扩增。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。