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核酸相关> DNA操作> 修饰酶
产品编号: D6966L
产品包装:1kU
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价格: ¥ 1998.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6966S CpG Methyltransferase (M.MpeI) 50U 168.00元
D6966M CpG Methyltransferase (M.MpeI) 200U 518.00元
D6966L CpG Methyltransferase (M.MpeI) 1kU 1998.00元

碧云天研发生产的CpG Methyltransferase (M.MpeI),简称M.MpeI,也称DNA methyltransferase from M. penetrans或M.MpeI CpG甲基转移酶,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种穿透支原体基因来源的CpG甲基转移酶。CpG Methyltransferase (M.MpeI)具有与CpG Methyltransferase (M.SssI) (CpG Methyltransferas from Spiroplasma sp. strain MQ1)相同的酶学功能,都能识别5'-CG-3'中序列中所有的胞嘧啶残基(C5)并对其进行甲基化修饰[1]。CpG Methyltransferase (M.MpeI)是表观遗传学领域的重要工具酶,可用于模拟真核生物基因组中的甲基化修饰,探索胞嘧啶甲基化的功能等。

碧云天生产的CpG Methyltransferase (M.MpeI)的CpG甲基化修饰的酶活性检测效果请参考图1。

图1. 碧云天CpG Methyltransferase (M.MpeI) (D6966)和CpG Methyltransferase (M.SssI)的酶活性检测效果对比图。在20µl反应体系中,加入终浓度为160µM的S-(5'-腺苷)-L-甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)和1μg的λDNA,以及图中指定量的本产品或N公司的M.SssI,37ºC孵育1小时进行CpG甲基化修饰反应,接着利用乙醇沉淀CpG甲基化修饰后的λDNA。随后在50µl反应体系中加入1U BstUI (CpG甲基化修饰敏感,一种识别CG^CG位点的限制性内切酶)及相应缓冲液中消化以上步骤获得的1μg CpG甲基化修饰后的λDNA,65ºC孵育1小时进行酶切反应。如图所示,本产品与N公司的M.SssI酶相比,具有类似的CpG甲基化修饰效果,即充分甲基化修饰的λDNA不能被BstUI所酶切降解。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:50mM Tris-HCl (pH7.5 at 25ºC), 100mM NaCl, 10mM DTT, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol.

1X Reactoin Buffer组成为:10mM Tris-HCl (pH8.0 at 25ºC), 50mM NaCl, 1mM DTT.

活性单位定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to protect 1μg of λDNA in a total reaction volume of 20μl in 1 hour at 37ºC against cleavage by BstUI restriction endonuclease.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6966S-1 M.MpeI (4U/µl) 12.5µl
D6966S-2 10X Reaction Buffer 50µl
D6966S-3 SAM (16mM) 50µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6966M-1 M.MpeI (4U/µl) 50µl
D6966M-2 10X Reaction Buffer 200µl
D6966M-3 SAM (16mM) 200µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6966L-1 M.MpeI (20U/µl) 50µl
D6966L-2 10X Reaction Buffer 1ml
D6966L-3 SAM (16mM) 1ml
D6966L-4 M.MpeI Storage Buffer 200µl
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

CpG Methyltransferase (M.MpeI) (4U/µl)使用时宜存放在冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

对于M.MpeI (20U/µl),如果无须使用高浓度的该酶,可以使用提供的M.MpeI Storage Buffer充分混合后即可稀释至4U/µl。

需要特别注意体外甲基化DNA应考虑DNA底物中可能的CpG二核苷酸的高密度。例如,λDNA (48,502bp)包含3112个CpG位点,因此0.1mg DNA/ml溶液的甲基转移酶甲基受体位点为19µM。这一点非常重要,因为甲基供体的推荐浓度为160µM,超过受体位点的8倍。适当降低DNA浓度(<0.02mg/ml)一方面可以确保甲基供体浓度仍然足够高,可驱动反应,同时反应过程中产生的S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)引起的潜在的最终产物抑制也能控制在有限的范围内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 使用超纯水将适量SAM (16mM)稀释10倍至1.6mM。稀释后不宜长期保存使用。
2. CpG甲基化修饰时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure Water (15-x)µl
10X Reaction Buffer 2µl
SAM (1.6mM) 2µl
M.MpeI (4U/µl) 1µl
Total Volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 4h or overnight
注:请把10X Reaction Buffer、超纯水和SAM等充分混匀后再加入M.MpeI (4U/µl),加入酶后用移液器吹打混匀或轻微Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经可以达到预期的实验效果,但也可以孵育1小时以上甚至过夜。推荐每微克的底物DNA使用4U M.MpeI,但如果底物DNA中CG底物浓度偏高,可以适当加大酶的用量或延长反应时间,也可以适当稀释DNA底物后在进行甲基化修饰反应。在必须保持DNA底物浓度的情况下,推荐使用本产品的大包装,提供了高浓度的M.MpeI (20U/µl),可以确保更有效地进行甲基化反应。
参考文献:
1. Wojciechowski M, Czapinska H, Bochtler M. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013. 110(1):105-10.
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