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核酸相关> 菌种与质粒> 原核载体
pET-Dual-N-GST-PreScission
产品编号: D2933-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2933-1μg pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg 888.00元
D2933-100μg pET-Dual-N-GST-PreScission 100μg 1169.00元

pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
T7 transcription start-1 1
GST-taq coding sequence 71-727
PreScission Protease recognation site sequence 728-751
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) 752-802
T7 promoter-2 859-875
T7 transcription start-2 876
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) 943-1004
S Tag coding sequence 1011-1055
T7 terminator 1107-1154
f1 origin 1192-1639
bla(Ap) coding sequence 1764-2621
pBR322 origin 3382
lacI coding sequence 4576-5658
T7 promoter-1 6049-6065

pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下:

pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.pdf

pET-Dual-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括:

AgeI AleI BbvCI BmgBI BmtI BseRI BsiWI
BsmI Bsu36I CspCI NheI NruI NsiI PmeI
PmlI PspAI RsrII SacII SexAI SfiI SmaI
SnaBI SpeI SrfI StuI TspMI XmaI

pET-Dual-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括:

XbaI T`CTAG,A 30 PspXI VC`TCGA,GB 999
NcoI C`CATG,G 69 AvaI C`YCGR,G 999
MscI TGG|CCA 281 BsoBI C`YCGR,G 999
BstBI TT`CG,AA 471 PaeR7I C`TCGA,G 999
SwaI ATTT|AAAT 501 XhoI C`TCGA,G 999
BamHI G`GATC,C 752 PacI TTA,AT`TAA 1072
EcoRI G`AATT,C 758 AvrII C`CTAG,G 1078
Eco53kI GAG|CTC 766 BlpI GC`TNA,GC 1096
SacI G,AGCT`C 764 DraIII CAC,NNN`GTG 1421
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 770 PsiI TTA|TAA 1549
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 770 SspI AAT|ATT 1629
AscI GG`CGCG,CC 771 AhdI GACNN,N`NNGTC 1833
PstI C,TGCA`G 777 BsaI GGTCTCN`NNNN, 1895
SbfI CC,TGCA`GG 777 BglI GCCN,NNN`NGGC 1951
SalI G`TCGA,C 783 FspI TGC|GCA 2056
HindIII A`AGCT,T 789 AlwNI CAG,NNN`CTG 3027
NotI GC`GGCC,GC 796 BstZ17I GTA|TAC 3672
AflII C`TTAA,G 808 Tth111I GACN`N,NGTC 3697
BsrGI T`GTAC,A 835 PflFI GACN`N,NGTC 3697
NdeI CA`TA,TG 943 Bpu10I CC`TNA,GC 4334
BglII A`GATC,T 950 PpuMI RG`GWC,CY 4434
MfeI C`AATT,G 956 HpaI GTT|AAC 4801
EcoRV GAT|ATC 964 BstEII G`GTNAC,C 5121
FseI GG,CCGG`CC 969 MluI A`CGCG,T 5303
AsiSI GCG,AT`CGC 980 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 5624
ZraI GAC|GTC 989 SphI G,CATG`C 5832
AatII G,ACGT`C 987 SgrAI CR`CCGG,YG 5984
Acc65I G`GTAC,C 993 ClaI AT`CG,AT 6028
KpnI G,GTAC`C 993 BspDI AT`CG,AT 6028

pET-Dual-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息:D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt
不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm 
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2933-1μg pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg
D2933-100μg pET-Dual-N-GST-PreScission 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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