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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
pCMV-N-HA
产品编号: D2733-1μg
产品包装:1μg
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价格: ¥ 888.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2733-1μg pCMV-N-HA 1μg 888.00元
D2733-100μg pCMV-N-HA 100μg 1169.00元

pCMV-N-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-HA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
HA tag 679–705
multiple cloning site 708–781
T7 promoter and T7 primer binding site 824–845
SV40 polyA signal 857–1240
f1 origin of ss-DNA replication 1378–1684
bla promoter 1709–1833
SV40 promoter 1853–2191
neomycin/kanamycin resistance ORF 2226–3017
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3018–3476
pUC origin 3605–4272

pCMV-N-HA质粒的图谱如下:

pCMV-N-HA质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2733 pCMV-N-HA.pdf

pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:

Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I

pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 858
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 1012
Sac I G,AGCT`C 656 Mun I C`AATT,G 1105
Sac II CC,GC`GG 663 Hpa I GTT|AAC 1118
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Mlu I A`CGCG,T 1241
Not I GC`GGCC,GC 669 Dra III CAC,NNN`GTG 1471
PspA I C`CCGG,G 709 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2130
Xma I C`CCGG,G 709 BseR I GAGGAG 16/14 2173
Srf I GCCC|GGGC 711 Stu I AGG|CCT 2176
Sma I CCC|GGG 711 Cla I AT`CG,AT 2195
BamH I G`GATC,C 716 Kas I G`GCGC,C 2354
Hind III A`AGCT,T 722 Nar I GG`CG,CC 2355
Pst I C,TGCA`G 732 Ehe I GGC|GCC 2356
EcoR I G`AATT,C 734 Bbe I G,GCGC`C 2358
EcoR V GAT|ATC 742 Msc I TGG|CCA 2437
Sal I G`TCGA,C 746 Tth111 I GACN`N,NGTC 2473
Acc I GT`MK,AC 747 BsrD I GCAATG, 8 2588
Bgl II A`GATC,T 752 Bsp1286 I G,DGCH`C 2658
PaeR7 I C`TCGA,G 758 Rsr II CG`GWC,CG 2871
Xho I C`TCGA,G 758 BsiC I TT`CG,AA 3037
Xba I T`CTAG,A 764 BstB I TT`CG,AA 3037
Spe I A`CTAG,T 770 Bsa I GGTCTC 7/11 3344
Bsp120 I G`GGCC,C 776 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3684
Apa I G,GGCC`C 780 ApaL I G`TGCA,C 3959

pCMV-N-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer (620–639): 5′ AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer (824-845): 5′ GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-HA的全序列信息: D2733 pCMV-N-HA-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2733-1μg pCMV-N-HA 1μg
D2733-100μg pCMV-N-HA 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pCMV-N-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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