碧云天生物技术-OrigamiB(DE3)超级感受态细胞(D1059S)

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OrigamiB(DE3)超级感受态细胞

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D1059S	OrigamiB(DE3)超级感受态细胞	10×100μl	388.00元
D1059M	OrigamiB(DE3)超级感受态细胞	50×100μl	1588.00元

碧云天生产的OrigamiB(DE3)超级感受态细胞，英文名OrigamiB(DE3) Super Competent Cells，是一种可以用于高效表达活性蛋白，尤其富含二硫键重组蛋白用的E. coli OrigamiB(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化，在严格按照使用说明进行操作时，转化效率达到1.0±0.5×10⁸cfu/μg DNA。

OrigamiB(DE3)菌株表达重组蛋白的水平正常，但总蛋白中具有生物学活性蛋白的得率是其他菌株的10倍以上[1]，这是由于遗传突变了宿主的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，有助于重组蛋白正确折叠增强蛋白的可溶性。

OrigamiB(DE3)染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶。需要卡那霉素和四环素抗性来维持还原酶的突变，因此只能使用带有氨苄抗性的表达载体，，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达[2]。

OrigamiB(DE3)菌株的基因型为F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D1059S	OrigamiB(DE3)超级感受态细胞	10×100μl
D1059M	OrigamiB(DE3)超级感受态细胞	50×100μl
—	说明书	1份

保存条件：

-80ºC保存，一年内有效。避免反复冻融，通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项：

感受态细胞禁止反复冻融，并应尽可能避免冻融，反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后，须尽快加入待转化样品，不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间，以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感，需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作，不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化，这样万一遇到转化失败的情况，还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用，放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞，加入DNA样品，例如质粒、连接产物或重组产物等，轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀，立即冰浴静置30min。注意：所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10分钟，后续可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30min并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增，复苏培养10-20分钟也完全足够了；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000g室温离心1min，沉淀细菌，吸除约900-950μl上清，余下的约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体，随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注意：如果用于质粒的转化扩增，可以仅取少量进行涂板；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献：
1. Prinz WA, Aslund F, Holmgren A, Beckwith J. J Biol Chem. 1997 Jun 20;272(25):15661-7.
2. López-Cano A, Martínez-Miguel M, Guasch J, et al. Microb Cell Fact.2022(21) ,1-10.
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