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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| C7996 | LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells | 1支/瓶 | 3998.00元 |
LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells，即LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa细胞，简称LSL-EGFP HeLa Cells或LSL-EGFP Hela细胞，是碧云天通过把含有loxP-STOP-loxP-EGFP元件和G418抗性的质粒转染HeLa细胞，经G418筛选最终获得的单克隆细胞株。本细胞株可以用于检测Cre重组酶的活性，也可以用于检测能表达Cre重组酶的质粒或病毒的效果。
LoxP (locus of X (cross)-over in P1)位点是一段34bp的DNA序列，其两端为两个13bp的反向重复序列(inverted repeats)，中间是8bp的间隔区(图1)。Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase)，也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase)，它可识别34bp的loxP位点并催化loxP位点之间的DNA发生重组；重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同，两个含单个loxP位点的DNA将发生融合：两个正向重复的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转(图2) [1,2]。
图1.loxP位点序列图。Cre重组酶与两端13bp反向重复序列(小写字母)结合，中间是8bp不对称中心间隔区(大写字母)，箭头所示为Cre重组酶的酶切位点。
图2. Cre-loxP位点特异性重组示意图。
本细胞株中含有loxP-STOP-loxP-EGFP元件，在没有Cre重组酶存在的情况下，EGFP的表达会被阻断，观察不到绿色荧光。在细胞中转染表达Cre重组酶的质粒(例如D2607 pCMV-Cre-mCherry)、与可以直接穿透细胞膜的D0512 TAT-Cre Recombinase孵育、或直接转染Cre重组酶(例如D0509 Cre Recombinase)时，Cre重组酶可以剪切并重组loxP位点，去除两个loxP位点之间的3×SV40 poly(A)这个STOP元件，从而激活EGFP的表达，随后可以通过荧光显微镜等荧光检测设备进行观察和检测。
本细胞株中的loxP-STOP-loxP-EGFP元件通过PCR扩增和测序验证。
本细胞株经过支原体检测(Mycoplasma Test)，检测结果为阴性。
本单克隆细胞株构建之前通过STR (short tandem repeats)鉴定。
Cre重组酶(Cre Recombinase)作用于本细胞株后，细胞的明场和荧光图片请参考图3。
图3. 碧云天LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells (C7996)功能鉴定图。按照每孔约10万LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells接种到24孔板进行培养过夜，使细胞密度能达到约60%。每孔用 PBS洗一次，每孔加入0.5ml含4μM TAT-Cre Recombinase的完全培养液(含有血清和链霉素\青霉素)。继续培养6h后，更换为不含TAT-Cre Recombinase (D0512)的完全培养液，24h后通过荧光显微镜下可以观察到细胞内绿色荧光。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
本细胞株的培养条件可以参考HeLa细胞的培养条件，可以同时在培养液中添加终浓度为200μg/ml的G418，以维持适当的筛选压力。进行Cre重组酶测试时，可以考虑去除G418，以减少G418可能产生的干扰。
HeLa细胞的基本信息如下：
| Organism | Tissue | Morphology | Culture Properties |
| Homo sapiens (Human) | Cervix | Epithelial | Adherent |
HeLa细胞的详细信息如下:
| General Information | |
| Cell Line Name | HeLa (Human Cervical Cancer Cells) |
| Synonyms | HELA; Hela; He La; He-La; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri |
| Organism | Homo sapiens (Human) |
| Tissue | Cervix |
| Cell Type | Epithelial |
| Morphology | Epithelial |
| Disease | Denocarcinoma |
| Strain | － |
| Biosafety Level* | 2 [Cells contain human papilloma virus] |
| Age at Sampling | 31 years adult |
| Gender | Female |
| Genetics | － |
| Ethnicity | Black |
| Applications | These cells are a suitable transfection host. This cell line can be used to screen for Escherichia coli strains with invasive potential. |
| Category | Cancer cell line |
* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
| Characteristics | |
| Karyotype | Modal number = 82; range = 70 to 164. There is a small telocentric chromosome in 98% of the cells. 100% aneuploidy in 1385 cells examined. Four typical HeLa marker chromosomes have been reported in the literature. HeLa Marker Chromosomes: One copy of Ml, one copy of M2, four-five copies of M3, and two copies of M4 as revealed by G-banding patterns. M1 is a rearranged long arm and centromere of chromosome 1 and the long arm of chromosome 3. M2 is a combination of short arm of chromosome 3 and long arm of chromosome 5. M3 is an isochromosome of the short arm of chromosome 5. M4 consists of the long arm of chromosome 11 and an arm of chromosome 19. Note: Cytogenetic information is based on initial seed stock at ATCC. Cytogenetic instability has been reported in the literature for some cell lines. |
| Virus Susceptibility | Human adenovirus 3 Encephalomyocarditis virus Human poliovirus 1 Human poliovirus 2 Human poliovirus 3 |
| Derivation | － |
| Clinical Data | 31 years; Black; female |
| Antigen Expression | － |
| Receptor Expression | － |
| Oncogene | － |
| Genes Expressed | Ysophosphatidylcholine (lyso-PC) induces AP-1 activity and c-jun N-terminal kinase activity (JNK1) by a protein kinase C-independent pathway. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. |
| Gene expression databases | ArrayExpress: E-MTAB-2706; E-MTAB-3610; GEO: GSM113863; GSM226739; GSM226875; GSM253298; GSM436128; GSM436129; GSM723055; GSM723056; GSM1088663; GSM1088664; GSM1088665; GSM1088666; GSM1374528; GSM1669875 |
| Metastasis | － |
| Tumorigenic | － |
| Effects | － |
| Comments | The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. HeLa cells have been reported to contain human papilloma virus 18 (HPV-18) sequences. P53 expression was reported to be low, and normal levels of pRB (retinoblastoma suppressor) were found. |
| Culture Method | |
| Doubling Time | 31~48 hrs |
| Methods for Passages | Wash by PBS once then 0.25% trypsin-EDTA solution and incubate at room temperature (or at 37℃), observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 1 to 5 minutes) |
| Medium | MEM+10% FBS |
| Special Remarks | － |
| Medium Renewal | 2 to 3 times per week |
| Subcultivation Ratio | 1:2 to 1:6 |
| Growth Condition | 95% air+ 5% CO2, 37℃ |
| Freeze medium | DMEM (high glucose)+20% FBS+10% DMSO，也可以订购碧云天的细胞冻存液(C0210)。 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C7996 | LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells | 1支/瓶 |
| — | 说明书 | 1份 |
对于细胞培养瓶或离心管运输的活细胞，室温3-5天有效。对于干冰运输的冻存细胞，液氮保存，长期有效；-80℃保存，2个月有效。
注意事项：本细胞株未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。使用者在发表研究论文或结果时，应注明细胞株的来源。
本细胞株相关资料参考ATCC (American Type Culture Collection)、DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)、JCRB (Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)、Cellosaurus (Swiss Institute of Bioinformatics)等网站信息，并结合碧云天实际培养信息综合而成。由于细胞培养的条件、代数等因素，实际细胞可能与本说明书提供的信息有一定的差异，具体以实际细胞为准。
STR结果可以与ATCC、DSMZ及中国国家实验细胞资源共享平台等网站的数据库进行比对，匹配度80%以上即可认为该细胞系正确。
本产品会根据细胞是否正在培养、目的地距离等因素确定运输方式：冷冻的细胞冻存管(干冰)、一小瓶贴壁培养的细胞或一小瓶/管悬浮培养的细胞(常温)。为了更好地耐受长途运输和环境温度等变化，对于正常贴壁培养的细胞，也可能会以悬浮的形式培养在细胞培养瓶或离心管中进行运输。
对于干冰运输的冻存细胞，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养，切勿再次低温冻存；若尚留有干冰，请直接复苏培养或立即将含有细胞的冻存管放入液氮中保存待用，切不可将细胞置于高温环境。
收到冻存的细胞后请尽快复苏细胞进行培养，以确认细胞活力、状态并保种。如暂时不进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃条件下保存2个月。
每支冻存管约含1×106个细胞，体积为0.5-1ml，预期存活率60-90%，建议复苏至1个6cm培养皿中。如果复苏后存活率较低，可以消化后转移至3.5cm培养皿中，这样细胞生长会更好。
如果本产品是常温运输，并且是培养瓶中充满完全培养液的贴壁细胞，收到细胞后请在显微镜下观察细胞生长状态，如果细胞密度超过85%请尽快进行传代操作；如果悬浮的细胞较多，请将培养瓶置于培养箱中静置过夜以使悬浮的细胞再次贴壁。如果收到的是常温运输的离心管装的悬浮细胞，可以直接取出转移至培养皿或培养瓶中培养。若培养液颜色正常则保留培养液继续培养，并且在首次更换培养液时，保留一半原培养液，并加入一半新鲜培养液，这样可以尽量避免由于培养液或血清差异导致细胞生长的不适应，确保细胞良好的生长状态。
细胞培养请在生物安全柜台中进行操作，并严格遵守无菌操作。
请在培养液中加入适量青霉素-链霉素溶液以防止可能的细菌污染，如碧云天的青霉素-链霉素溶液(100X) (C0222)。
理论上永生化细胞可无限传代，但为了保证细胞的良好状态，建议最早培养的几代细胞就冻存一批，并每培养一段时间后复苏早期冻存的细胞进行培养。
接收、处理、保存、丢弃及使用细胞的时候要遵守相关法律法规，充分考虑可能存在的风险和责任，采取适当的安全和处理措施尽量降低对健康或环境的危害。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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