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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| C0511 | DEAE-Dextran细胞转染试剂盒 | >200次 | 391.00元 |
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒(DEAE-Dextran Transfection Kit)是一种适合于把DNA转染到培养的真核细胞中的转染试剂盒。
关于DEAE-dextran的细胞转染方法早在1968年就有相关论文发表。DEAE-dextran可以促使DNA结合到细胞膜上，然后通过内吞作用(endocytosis)进入细胞。基于DEAE-dextran的细胞转染方法适用于瞬时转染(transient tranfection)，但不适用于筛选稳定表达细胞株。DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。
目前基于DEAE-dextran的细胞转染方法有两种，一种方法为把DNA和DEAE-dextran混合后加入到细胞中，另一种方法为先用DEAE-dextran预处理细胞，然后再加入DNA。后一种方法是在前一种方法的基础上经过改进而产生的，对于一些细胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB细胞等，后一种方法可以增加细胞对DNA的摄入量，显著改善转染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解，从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件，如需获得更加理想的转染效率，必须自行摸索上述各种转染方法，找出优化的转染方法。
基于DEAE-dextran的细胞转染方法不仅可以转染贴壁细胞，也可以转染悬浮细胞。
转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
关于不同的细胞转染试剂的主要特点和差异方面的比较，以及如何选择适当的细胞转染试剂，可参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/transfection.htm。
对于六孔板而言，一个包装的本转染试剂如使用常规方法可以转染2500个孔，如使用预处理方法可以转染200个孔。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C0511-1 | DEAE-Dextran溶液 | 20ml |
| C0511-2 | 10XPBS | 20ml |
| C0511-3 | 氯喹溶液 | 3.5ml |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
4℃保存，一年有效。
注意事项：
使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提，以保证获得较高的转染效率。
转染前细胞必须处于良好的生长状态。
试剂盒中各试剂均经过无菌处理，可以直接使用。在细胞转染过程中要严格注意无菌操作。
需自备用于洗涤的PBS或HBSS，以及用于稀释10XPBS的无菌水。
稀释或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用试剂盒中提供的10XPBS稀释。
氯喹溶液对人体有害，请注意适当防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. DEAE-Dextran常规转染方法
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作)：
在转染前一天(20-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内，使第二天细胞能达到约40-70%满。
b. 混匀试剂盒中各试剂。取适量10XPBS，稀释为1XPBS。37℃预热自备洗涤液(PBS或HBSS)。
c. 参考下表，对于待转染的六孔板中一个孔的细胞，依次加入适量1XPBS，2μg DNA，以及8μl DEAE-Dextran溶液，使最终体积为170μl，用枪轻轻吹打混匀。
注意：不宜Vortex或离心。
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One well for 6-well plate | One well for 24-well plate | 60mm dish | 100mm dish |
| 1XPBS | (162-x)μl | (40-x)μl | (325-x)μl | (540-x)μl |
| DNA | xμl(2μg) | xμl(0.5μg) | xμl(4μg) | xμl(7μg) |
| DEAE-Dextran溶液 | 8μl | 2μl | 17μl | 28μl |
| 总体积 | 170μl | 42μl | 342μl | 568μl |
| 均匀滴加到细胞表面，细胞培养箱内孵育30分钟，孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润 | ||||
| 添加细胞培养液量 | 1.7ml | 0.4ml | 3.5ml | 6ml |
| 添加氯喹溶液量(选做) | 17μl | 4μl | 35μl | 60μl |
| 细胞培养箱内培养不超过2.5小时或出现细胞毒性前更换培养液，继续培养48-72小时 | ||||
注1：对于六孔板中一个孔的细胞，DNA用量可以在1-3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以大致按照细胞培养面积按比例进行换算。
d. 去除细胞培养液，用PBS洗涤细胞2-3次，吸除残留液体。
e. 把170μl DEAE-Dextran-DNA混合物均匀滴加到细胞表面。
f. 细胞培养箱内孵育30分钟，孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润。
g. 参考上表，每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约DEAE-Dextran-DNA混合物体积的10倍)。
h. 选做：参考上表，每孔加入17μl氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入。 i. 细胞培养箱内培养不超过2.5小时或在出现明显的细胞毒性前，更换新鲜细胞培养液继续培养。
j. 通常转染后48-72小时可以检测转染效果。
2. DEAE-Dextran预处理转染方法
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作)：
在转染前一天(20-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内，使第二天细胞能达到约40-70%满。
b. 混匀试剂盒中各试剂。取适量10XPBS，稀释为1XPBS。37℃预热自备洗涤液(PBS或HBSS)。
c. 参考下表，取适量试剂盒中提供的DEAE-Dextran溶液用1XPBS稀释10倍。对于六孔板的一个孔，取0.1ml DEAE-Dextran溶液，加入0.9ml 1XPBS，混匀。
d. 参考下表，取适量DNA用1XPBS稀释。对于六孔板的一个孔，取2μg DNA，加入适量1XPBS使最终体积为162μl。
| One well for 6-well plate | One well for 24-well plate | 60mm dish | 100mm dish | ||
| 1XPBS | 0.9ml | 225μl | 1.8ml | 3.6ml | |
| DEAE-Dextran溶液 | 0.1ml | 25μl | 0.2ml | 0.4ml | |
| 稀释的DEAE-Dextran溶液 | 1ml | 250μl | 2ml | 4ml | |
| DNA | xμl(2μg) | xμl(0.5μg) | xμl(4μg) | xμl(7μg) | |
| 1XPBS | (162-x)μl | (40-x)μl | (325-x)μl | (540-x)μl | |
| 稀释的DNA | 162μl | 40μl | 325μl | 540μl | |
| 去除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤两次，每次3-5分钟 | |||||
| 加入稀释的DEAE-Dextran溶液，室温孵育9分钟，洗涤两次 | |||||
| 把稀释的DNA均匀滴加到细胞表面，孵育30分钟，孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润 | |||||
| 添加细胞培养液量 | 1.7ml | 0.4ml | 3.5ml | 6ml | |
| 添加氯喹溶液量(选做) | 17μl | 4μl | 35μl | 60μl | |
| 细胞培养箱内培养不超过2.5小时或出现细胞毒性前更换培养液，继续培养48-72小时 | |||||
注1：对于六孔板中一个孔的细胞，DNA用量可以在1-3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以大致按照细胞培养面积按比例进行换算。
e. 去除细胞培养液，用PBS或HBSS室温洗涤两次，每次3-5分钟。
f. 去除洗涤液，加入1ml经10倍稀释的DEAE-Dextran溶液，室温孵育9分钟。
g. 去除稀释的DEAE-Dextran溶液，用PBS或HBSS轻轻洗涤细胞两次。洗涤时要特别小心，经DEAE-Dextran预处理后贴壁细胞容易脱落。
h. 去除洗涤液，把步骤2d准备的162μl含有2μg DNA的1XPBS溶液，均匀滴加到细胞表面。
i. 细胞培养箱内孵育30分钟，孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润。
j. 参考上表，每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约稀释的DNA体积的10倍)。
k. 选做：参考上表，每孔加入17μl氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入。加入氯喹后，
在4小时内或出现明显的细胞毒性前必须更换新鲜细胞培养液。氯喹的具体处理时间，对于不同的细胞需根据实验操作结果进行确认。
l. 通常转染后48-72小时可以检测转染效果。
常见问题：
1. 转染效率低或几乎没有转染。
很多时候是由于过多细胞死亡导致。可以考虑适当减少DEAE-Dextran溶液的用量，或适当缩短细胞暴露于DEAE-Dextran的时间；减少氯喹溶液的处理时间；一些对DEAE-Dextran特别敏感的细胞，在转染时可以适当增加细胞密度。优化DNA的用量通常可以获得较高的转染效率。另外，确保DNA的纯度，例如确保A260/A280>1.8，可以改善转染效率。
2. 转染效率不稳定。
如果有支原体污染通常会导致转染效率不稳定，此时只需更换没有污染的细胞就可以了。另外，细胞生长状态不佳，也容易导致转染效率显著下降。
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