免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation, Co-IP or CoIP)是研究体内蛋白质-蛋白质相互作用以及建立蛋白间相互作用关系的有力工具，是经典的在生理条件下利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体，能够特异性富集所研究的目的蛋白及其结合蛋白的一项技术，是确定蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

Co-IP实验原理：
Co-IP技术是当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。以细胞内源性靶蛋白(Protein X)为诱饵，将特异性识别Protein X的抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体结合的Protein A/G(预先结合固化在琼脂糖凝胶或磁珠上)，这样与Protein X有相互作用的蛋白(Protein Y)会被一起沉淀下来，形成"结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein A/G凝胶/磁珠"复合物，分离纯化该复合物后通过凝胶电泳，然后应用Western blot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白或在相同复合物中的蛋白。

碧云天免疫共沉淀技术原理示意图

Co-IP实验结论：
通过特异性识别Protein X的抗体进行对于细胞或组织裂解液进行Co-IP，最终通过Western或质谱分析鉴定出Protein Y，并且未添加Protein X抗体的阴性对照组没有检测到Protein Y。此时最常见的错误是，推导获得Protein X和Protein Y存在相互的作用的结论。实际上，此时只能获得Protein X和Protein Y在同一个复合物中的结论，而不能获得两者存在直接相互作用的结论。

如果需要获得Protein X和Protein Y存在直接相互的作用的结论，还需要进行一些能证明存在直接相互作用的实验，例如使用体外纯化蛋白的Co-IP, GST pull down、表面等离子体共振检测(Surface Plasmon Resonance, SPR)、共结晶并进行结构测定、核磁共振检测等，以及细胞内的基于距离邻近发生荧光转移的FRET检测等实验。

Co-IP实验优势：
a) Co-IP能够反应蛋白在天然组织细胞状态下存在的直接/间接互作关系蛋白；
b) Co-IP可以找出直接/间接互作的多个蛋白，研究复合体的组成；
c) 通过与质谱鉴定初筛到一系列未知蛋白通过Co-IP做相关蛋白相互作用研究。

对科研来说如此重要的实验，小云怎么可能不为大家准备产品呢~

碧云天生产的Co-IP产品包括琼脂糖凝胶系列和BeyoMag™磁珠系列。
其中琼脂糖凝胶系列包含Protein A/G/A+G Agarose (Fast Flow, for IP)，各种标签蛋白亲和凝胶，各种免疫沉淀试剂盒（凝胶法）；
此外还有高性价比的BeyoMag™ 磁珠系列，包含BeyoMag™ IgG 系列磁珠，融合标签系列磁珠及免疫沉淀试剂盒（磁珠法）。碧云天专门为磁珠产品设计了磁性分离装置，也称磁力分离架、磁性分离架、磁珠分离架或磁力架，主要用于磁性微粒的固液快速分离，是基于磁珠法进行免疫沉淀等实验的必备装置。
碧云天更有可以有效解决免疫沉淀后Western检测时轻链和重链的干扰问题的标签蛋白洗脱多肽以及一些常规的裂解液及loading buffer等试剂。其中Western及IP细胞裂解液(P0013)和RIPA裂解液，细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒（货号P0027/P0028）系列产品和BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)等产品均被Nature, Cell 等文献所使用。

碧云天生产的高品质免疫沉淀产品总有一款能够满足您的实验需求~

此外，碧云天还提供免疫共沉淀技术服务（仅需2-3周）、质谱检测（仅需3-4周）和其他免疫共沉淀相关技术服务。

应用案例

案例一：
2021年7月华中科技大学同济医学院基础医学院施静教授团队在《Science Advances》（IF：14.957）发表了题为Annexin-A1 SUMOylation regulates microglial polarization after cerebral ischemia by modulating IKKα stability via selective autophagy 的研究成果。该研究发现了SUMO修饰的ANXA1调节小胶质细胞极化，并在小胶质细胞ANXA1 SUMO修饰可以改善脑缺血治疗。首先证实了ANXA1可以被SUMO化，通过Co-IP证实ANXA1能够与SUMO2结合强烈，与SUMO3结合适度，与SUMO1结合微弱，进一步发现SUMO化的ANXA1能够促进NF-κB信号通路重要调节分子IKKα的降解从而抑制NF-κB信号通路，进而抑制IL-1b, IL-6, TNF-α等炎症因子的分泌，从而改善脑缺血后小胶质细胞的过度炎症反应，为脑缺血的治疗提供了新的靶点。
值得注意的是，该研究团队使用碧云天Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)（P2055），通过CoIP证实了K113/161/257位点是ANXA1的主要SUMO2修饰位点，类泛素化修饰的ANXA1通过IKKα调控NF-kB的激活。
此外，该研究还用到了碧云天LPS (TLR4激活剂)（S1732），Recombinant Murine IFN-γ（P6137），Recombinant Murine IL-4（P5916），Lyso-Tracker Red (溶酶体红色荧光探针)（C1046），RIPA裂解液(强)（P0013B）以及BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)（P0010S）。

案例二：
2021年8月清华大学北京生物结构前沿研究中心李丕龙老师团队在《Cell Reports》（IF：9.995）发表了题为Compartmentalization-aided interaction screening reveals extensive high-order complexes within the SARS-CoV-2 proteome 的研究成果。该研究提出了一种基于纤维素相分离的创新交互筛选策略即细胞中蛋白质-蛋白质相互作用的区隔化(CoPIC)，利用CoPIC筛选，李老师团队绘制了rtc相关病毒蛋白之间的相互作用网络，从而为了解SARS-CoV-2生物学特性和开发COVID-19治疗干预措施提供了机会。 该研究团队使用碧云天Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)（P2055），通过CoIP证实了几个rtc相关因素之间的相互作用。
此外，该研究还用到了碧云天Hoechst 33258染色液（C1017），兔IgG（A7016）以及4%多聚甲醛固定液（P0099）。