1.玻璃板清洗后，为了使表面的水快速晾干，可以在烘箱中放置几分钟，拿出来的时候一定要晾到室温再灌胶，不然很容易产生气泡；

2.夹胶板时，玻璃板要对齐，以免漏胶。灌胶前可以加入少量水检漏或者用配好的分离胶溶液封边。

3.过硫酸铵的作用是提供自由基引发丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的聚合反应，故一定要新鲜配制或者适当低温保存。室温贮存过久的过硫酸铵溶液不能使用。此外，10%的过硫酸铵溶液要现用现配，4度冰箱贮存建议不超过7天。

4.加水/无水乙醇液封时，速度要慢，可用1ml移液器，甚至使用0.2ml移液器沿着胶板上沿反复移动，不然很容易将分离胶冲变形。液封的目的是使分离胶上表面平直，并排除气泡。

5.样品梳需一次平稳插入，梳口处不得有气泡，梳底需水平。

6.在实验过程中，除了均一浓度胶，梯度胶也经常被使用。梯度胶比单一浓度凝胶的分离范围更宽，可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。另一个优点是梯度胶可以分辨分子量相差较小，在固定浓度胶中不能分辨的蛋白质。

SDS-PAGE凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把凝胶配制所需的缓冲试剂、SDS等预混合成下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X)，简化了凝胶配制的步骤。下层胶缓冲液中含Tris pH8.8及适量SDS，上层胶缓冲液中含Tris pH6.8及适量SDS。

SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒以及凝胶预混液把凝胶配制所需的Tris-HCl、Acr-Bis(29:1)、SDS等预混合成下层胶预混液和上层胶预混液，使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂（过硫酸铵或其替代物）和TEMED即可简单快速地完成下层胶(分离胶)和上层胶(堆积胶)的配制。

大家可以根据自己的实验需求选择合适的配胶试剂盒，也可以选择更加便捷的预制胶产品。更多关于凝胶超快速配胶试剂盒和预制胶的信息请点击链接。

凝胶超快速配胶试剂盒：(点我查看)

预制胶：(点我查看)

1.内槽补满电泳液后再拔梳子；

2.加样前每个孔如果能用移液器吸入电泳液轻轻吹打一下，会使电泳效果更佳。

3.可在蛋白变性前调整蛋白浓度，使上样量尽量保持一致。如果已经变性的蛋白浓度本身不一致，可以通过加入1X蛋白上样缓冲液调整。此外，上样量不要太多，以避免渗漏到邻近加样孔。

4.加样前，样品都需要充分煮沸。如果有明显的沉淀物或悬浮物（常见的包括可能结合了一些蛋白的基因组DNA，特殊细胞或组织中的不溶物等），需要离心去除，以免干扰蛋白电泳或者使上样量不太均匀。

5.每次电泳时需要使用预染蛋白质分子量标准（蛋白marker）来观察电泳效果和转膜效果，以及判断蛋白分子量大小。推荐使用彩色预染蛋白质分子量标准以便更加方便直观地观察。

6.为了确保Western blot结果的准确性和特异性，可以考虑设置合适正确的对照，具体如下——

阳性对照：明确表达检测蛋白的组织或细胞，用于检测抗体的工作效率和实验操作的正确与否；

阴性对照：明确不表达检测蛋白的组织或细胞，用于检测抗体的特异性；

1.上样后应尽快开始电泳，以减少小蛋白条带的扩散；

2.电泳时通常推荐在上层胶时使用低电压恒压电泳，使样品跑得慢一些，充分浓缩而在溴酚蓝进入分离胶时使用高电压恒压电泳。实际过程中也可以采用恒电流模式，可根据自己的时间来调节。电泳至溴酚蓝靠近凝胶底部即可终止电泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。

3.关于电泳液，也可以回收1-2次作为外槽电泳液，根据实验室情况决定。内槽电泳液请每次新鲜配制。建议先配10x的，然后现用现稀释。